1、内因：核糖2 -羟基可在碱性条件下形成烷氧负离子，并可向3 -位磷酸二酯键进行分子内的亲核进攻(向磷-氧双键)，形成五元环的环状磷酸二酯，同时离去部分RNA 片段，造成RNA降解；
2、外因：生物体内部和外部环境中存在大量的RNase,并且Rnase不易失活，高温下仍能正确的折叠恢复活性。1、取样过程：取样过程要迅速，所取组织样本离体后，经迅速清洗等处理后，应立即置于液氮中速冻至少1h以上，之后在转移至-80℃进行保存。液氮速冻能有效抑制样本中内源性Rnase的释放；2、运输过程：运输过程中要采用足量的干冰运输，保证运输的低温性；（1）使用无菌无核酸酶低吸附的枪头、收集管等耗材；（2）所有使用的剪刀，镊子等需经灭菌消毒后使用，且不能交叉使用。（3）实验台面需每天使用Rnasezap进行擦拭清洁；（1）选择性使用一些处理RNase的蛋白变性剂（如酚、氯仿、异硫氰酸胍等）；（2）在裂解液中加入还原剂等（如β-巯基乙醇、二硫苏糖醇等）（3）实验中必须戴口罩，以及勤换手套，长发必须盘起或戴头罩；（4）严格执行实验标准操作，试剂使用前进行检查，减少实验中出现的失误；根据样本的物种和组织类型选用合适的提取方法（可参考以往提取成功的案例选择）。当样本珍贵或物种特殊时，优先取少量样本进行提取方法的摸索，确定方法后在进行后续提取；（2）试剂盒清洗液buffer使用前需检查是否添加了无水乙醇如果在实验过程中使用了未添加乙醇的清洗液，会因清洗液buffer浓度过高导致吸附柱的缓冲环境发生改变，从而影响吸附柱吸附RNA的能力。因此在启用新的RNA提取试剂盒时，检查清洗液，并根据清洗液瓶身要求添加相应体积的无水乙醇。添加完成后，在清洗液的瓶身和瓶盖上打勾做好标记，并写好添加的日期。实验员在实验操作时旁边应放有实验操作sop，并严格按照sop进行实验操作。组织取样时尽可能贴近干冰，最好一次就能剪切所需的样本量，避免反复切割，导致组织样本软化。动物组织样本取样：大部分动物组织样本于冻存管中保存，取样时，首先查看样本类型，再检查样本组织块的大小（注意要贴近干冰上检查）；若样本组织块较大且紧贴冻存管壁时：选择合适管子口径大小的剪刀，贴管壁剪切扣取适当体积的组织块；若样本组织块较大或不易被剪切的组织时：可将组织放于浸满液氮的研钵中，用研杵把组织敲成小块，在低温下重新转移回冻存管后，在进行取样操作；植物组织样本取样：大部分植物组织样本于锡箔纸中保存，取样时，首先查看样本类型，再检查样本组织块的大小（注意要贴近干冰上检查）；若为根、叶、茎、花等且易剪切的组织时：用剪刀或镊子夹取所需的组织量；若为果实类&或体积较大或不易剪切的组织时：可将组织放于浸满液氮的研钵中，用研杵把组织敲成小块，在低温下重新转移回冻存管后，再进行取样操作；（1）组织取样量不宜过多，防止因裂解不充分导致RNA降解如果使用试剂盒提取RNA，样本取样量参考试剂盒标准取样量。建议可以小于试剂盒标准取样量；对于RNA丰度较高的样本组织（如肝脏、脾脏等组织），可以适当减少取样量或者补充裂解液，减少因裂解不充分从而可能导致的样本降解。（2）细胞样本需要裂解充分，避免因裂解不充分引发的RNA降解氯仿抽提时，预估一下上清的体积，选用合适量程的移液枪；在吸取上清时，拿样本的手要稳，防止震动导致水相被污染；根据上清体积，选用最贴近量程的移液器进行吸液，注意不要吸取到沉淀，枪头吸液要随着液面的下移而下移；柱式法洗脱RNA之前，要高速空离柱子两分钟，保证无洗液的残留。过柱法洗脱RNA时，要将洗脱试剂加入柱子膜的中心，但枪头不可抵触碰到膜，防止损坏柱子膜，影响RNA洗脱效果。过柱法洗脱RNA时，对于一些较为粘稠的样本或RNA丰度较低的样本，为了提高RNA得率，可以两次洗脱以增加RNA得率。点击下方图片进入云平台资料汇总：
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