开讲了单细胞 | 单细胞样本前处理搞不定？看这个视频轻松学会
科技君
“开讲了单细胞”正式开课啦！
这个课程都有什么内容呢？
实验室小A
科技君
本次“开讲了单细胞”系列将从以下4个方面为大家展开讲解，快来搬好小板凳！
单细胞组织样本前处理
单细胞图谱研究分析技巧
Dr. Tom单细胞交互式数据挖掘系统操作
单细胞全流程服务介绍
哇，这简直就是科研福利~
实验室小A
科技君
话不多说，本期先为大家介绍样本前处理！
单细胞样本前处理是单细胞测序成功的关键一环。选择目标研究样本，以正确的方式采集，采用适当的酶对组织进行消化分解，才能获得较好活细胞得率和质量，呈现更加真实的样本的细胞类群组成和转录状态。
科技君
那么，单细胞样本前处理会遇到哪些问题呢？
今天就跟大家一览几个关键问题点解析和推荐解决方案。
—
1
—
样本采集关键点有哪些？
（点击视频可放大观看）
科技君划重点：
选择好样本类型后，接着需要对样本进行处理和采集。那其中的注意事项有哪些呢？
1. 选择合适的供体
发育年龄差异以及样本处理时间先后等都会影响最后的细胞得率和质量。
2. 明确具体的采样部位或组织类型
同一器官或组织的不同部位其形态功能，细胞类群表达可能存在非常大的差异。
3. 注意样本的采集方式
组织的解剖和采集顺序、方式（灌注等）可能影响样本制备成功率、细胞类群及表达。
—
2
—
单细胞研究样本，该选择细胞还是细胞核？
（点击视频可放大观看）
科技君划重点：
选择好单细胞组织样本后，首先面临的一个问题是，这个组织是选择做细胞还是细胞核呢？
这两者各有优劣，具体问题需要具体分析👇
选择细胞进行研究可能遇到的困难：
样本选择范围受限
不适用于液氮速冻、含大细胞（直径大于40μm）和难解离的样本。
引发“细胞转录偏好”
解离过程可能会诱导应激基因的表达，引发人为转录改变。
引发“细胞类型偏好”
解离过程也会存在易丢失部分类型细胞的情况，如较为敏感的细胞可能因为消化过度而死亡，或是难解离的细胞可能因为消化不充分而未能完全释放，影响最终细胞类型鉴定的结果。
选择细胞核进行研究可能遇到的困难：
存在细胞偏好性
相较于细胞，选择细胞核会相对保留更多细胞类型，但同时也可能会造成一部分免疫细胞缺失，不推荐用于肿瘤、免疫相关研究。
检测到的基因少
细胞质mRNA缺失，成熟mRNA比例更低，造成最后检测到的单个细胞核内表达基因数偏少。
质控更困难
冷冻方式和时间均对核RNA产生影响，但无法通过核状态判断RNA质量，且制备过程中RNA存在一定降解风险，增加了核样本质控难度。建议可以先对样本进行整体的RNA质量检测。
—
3
—
组织解离消化的关键是什么？
使用的消化酶有哪些推荐？
（点击视频可放大观看）
科技君划重点：
组织解离消化成单细胞的关键，我们需要明确，解离实质是通过酶解消化掉组织内胞外基质、以及细胞间连接。
解析细胞外基质
组成成分：结构蛋白（包括胶原蛋白和弹性蛋白），蛋白聚糖（核心蛋白聚糖、透明质酸等），粘连糖蛋白（纤连蛋白、层粘连蛋白）。
对应消化酶推荐：胶原酶、中性蛋白酶、弹性蛋白酶和透明质酸酶等。
解析细胞间连接
细胞连接类型：紧密连接、黏着连接、间隙连接、桥粒、半桥粒。
组成成分：钙黏蛋白、选择素、免疫球蛋白类、血细胞整联蛋白、整联蛋白。
对应消化酶推荐：胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等。
推荐其他酶
DNase：降解细胞裂解释放的游离DNA，减少细胞结团和聚集。
让单细胞更简单
华大科技结合自主单细胞DNBelab C系列单细胞平台，提供一站式单细胞服务，从单细胞方案设计，到样本取材选样及邮寄方式建议等，并可以提供组织解离以及流式细胞分选服务，结合DNBSEQ™高保真测序，采用多种分析思路，为单细胞规模化研究及发文之路提供最优解决方案。
接下来，科技君将持续为大家带来单细胞研究全流程关键点分享，且听且珍惜哦！
更多关于单细胞图谱研究分析工具/技巧、Dr. Tom单细胞交互式系统操作和单细胞服务介绍等，请锁定“开讲了单细胞”，华大科技小讲堂与您不见不散~
供稿：橙小c、豆儿
编辑：市场部
近期热文
了解更多产品服务及资讯，关注我们！