突破！Cellectis开发的这款带有嵌入式安全开关的「一体化」CAR结构，有望再度革新细胞治疗丨医麦黑科技

今天是2018年6月22日

农历五月初九

医麦客：治疗效果与保护措施相结合的CAR-T

2018年6月22日/医麦客 eMedClub/--当Arie Belldegrun和David Chang全面接手辉瑞(Pfizer)所有的现成(off the shelf)CAR-T疗法研发管线时，他们强调了与Cellectis的合作项目，可能会使Allogene Therapeutics走上商业化的道路。

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David Chang(左)和Arie Belldegrun(图片来源 labusinessjournal.com)

令人振奋的是，两个月后，Cellectis紧接着又开发了一种更安全的下一代嵌合抗原受体(CAR)构建体，现已定位于临床应用。这种新型CAR-T将治疗效果与保护措施相结合，可能为通过供体细胞制成的“同源”CAR-Ts铺平道路，并且能够以现货(off the shelf)的方式出售。

近日，这项由Cellectis和辉瑞共同参与的研究发表在Nature旗下的《Scientific Reports》期刊上，论文中报道了这款集合了抗癌效力、安全性“自杀开关”以及纯化和检测能力的一体化CAR架构，且使用Rituxan(利妥昔单抗，rituximab)在体外和体内均能够有效的耗尽大部分的CAR-T细胞。

关于自杀开关这个概念，业内人士早已耳熟能详。从理论上来说，CAR-T细胞是一种可以留在患者体内多年的活性药物，考虑到CAR-T众所周知的安全性问题——例如细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性(NT)，紧急开关已经上升到“救命稻草”这个级别了。

与CAR表达相结合的不同安全系统的特点(图片来源 nature)

创新团队负责人Julien Valton表示，Cellectis在这里取得的重大成就是将安全机制和其他理想品质结合在一个分子中，这使得CubiCAR与目前临床中大多数的自杀开关区别开来，而CAR和开关处于不同分子中，会导致两者之间潜在的不平衡性。

他说：“有时候，我们看到了CAR表达，却看不到自杀开关。”

CubiCAR——本研究中使用的第二代CAR构建体(图片来源 nature)

自Cellectis在三年前提出该项目以来，辉瑞一直参与该项目，为Valton的团队提供了针对多发性骨髓瘤的以BCMA为靶点的CAR，该产品现在属于Allogene公司，目前，其正在与Cellectis合作开发该结构的临床应用。与此同时，Cellectis也将CubiCAR结构用于他们自己的CAR中，包括以CD123、CD22和其他抗原为靶点的CAR-T细胞疗法。

另外，Bellicum和Autolus等公司也在致力于追求更好、更安全的细胞疗法，第一步瞄准血液癌症，最终的理想化状态是能够有效治疗实体瘤。其中Cellectis在研的CubiCAR自杀开关需要被抗体激活，但其他公司大都选择了小分子介导的方法。其中之一就是Poseida Therapeutics，其首席执行官Eric Ostertag告诉C＆EN，抗体介导的开关可能需要数天时间才能真正起作用。

Julien Valton博士(图片来源 endpts)

对此，Valton说：“在体外实验中，使用临床剂量的利妥昔单抗(rituximab)后，大约15分钟就能够耗尽绝大部分的Safeguard CAR-T细胞。且该动力学数据与文献中使用ICaspase9和RQR8自杀开关获得的数据一致。但没有真正的方法能够衡量它，直到该疗法在人体内进行测试。”

用于表征稳定表达CubiCAR(C14)构建体的原代T细胞的工作流(图片来源 nature)

此外，Valton还补充道，CubiCAR也可以通过QBEND10(CD34抗体)进行细胞检测和纯化，这意味着可以有效提取活性成分。

论文中详述了这种被称为CubiCAR的三功能CAR架构。实验过程中，为了确定最佳的安全CAR体系结构，研究人员装配了14种不同的含有1、2或3种CD20模拟表位的构建体，都是非免疫原性的并且对利妥昔单抗结合具有特异性。这些模拟表位被移植到第二代CAR构建体(靶向BCMA抗原)的细胞外部分的不同位置。

此外，研究人员还组装了另外两个含有人CD34表位的构建体，以允许有效的细胞富集。出于生产量的考虑，所有构建体首先作为mRNA在原代T细胞中转染，并在转染后的一天内筛选其在T细胞表面表达的能力，以允许利妥昔单抗消耗并刺激其抗肿瘤活性。

CubiCAR T细胞在体内显示出抗肿瘤活性，并且能够被利妥昔单抗特异性消耗(图片来源 nature)

在小鼠模型中，研究结果显示：CubiCAR和CAR-T细胞都能够发挥有效的抗肿瘤作用。其中，在接受CubiCAR-T细胞治疗的小鼠中，注射利妥昔单抗可以有效耗尽CAR-T细胞，反之，而未修饰的CAR-T细胞则不受影响(CubiCAR可用于纯化，追踪和消除CAR-T细胞)。

Philippe Duchateau博士(图片来源 Cellectis)

Cellectis的首席科学家Philippe Duchateau在一份声明中表示，CubiCAR结构不仅集成了紧凑的安全保护装置，可快速高效地消耗CAR-T细胞，而且还兼容针对不同靶标设计的多个scFvs，从而使其具备独特的潜力，使CAR T-细胞免疫疗法更安全。”

Allogene的首席科学家Barbra Sasu博士在一份声明中表示：“自体CAR-T疗法治疗血液癌症的变革性影响已经确定。现如今，我们计划评估这种CubiCAR方法和其他新型CAR-T疗法，这是我们和Cellectis合作开发的扩大的CAR-T研发管线。”

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另外，波士顿大学的研究人员也在开发一种一体化(all-in-one)的方法，他们称之为SUPRA CAR。这是一种分离的、通用的和可编程的CAR系统，旨在解决CAR-T细胞治疗的安全性、特异性和患者复发问题。使用适配器分子，研究人员能够控制T细胞激活的强度，或在体外完全关闭它。目前，该团队正在与合成生物学公司Senti Biosciences合作，将他们的发现转化为到临床上去。

参考出处：

https://seekingalpha.com/article/4182805-cellectis-technological-leader-car-t-cubicar-still-buy

https://www.nature.com/articles/s41598-018-27264-w

https://endpts.com/cellectis-rising-star-allogene-design-an-all-in-one-car-construct-with-embedded-safety-switch-as-the-new-partners-angle-for-the-clinic/

https://www.fiercebiotech.com/research/cellectis-all-one-car-t-packages-therapy-and-safety-one-molecule

https://www.businesswire.com/news/home/20180612006446/en/Cellectis-Publishes-Methods-Improve-Clinical-Chimeric-Antigen

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