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2020年9月15日/医麦客新闻 eMedClub News/--全球生物药市场中，单克隆抗体（含融合蛋白）是最近5年增长最快的一个类别；2018年，单抗类产品一枝独秀，贡献了近四成的生物药。与美欧相比，中国抗体药市场规模及生物药市场的比重较少，蕴藏着巨大的发展潜力和空间。目前虽然中国总的抗体药物上市批准数量仍低于欧美，但近年来中国抗体药物市场规模增长迅猛，增速接近欧美市场的两倍。
据统计，今年以来，国家药品监督管理局（NMPA）累计受理了超过200款国产抗体新药的临床试验申请。进入2020年，国内抗体药物领域也迎来了一系列的里程碑事件。
首个国产HER2单抗获批上市
2020年6月19日，三生制药旗下三生国健药业自主研发的注射用伊尼妥单抗（商品名：赛普汀®）正式获得国家药品监督管理局（NMPA）批准。这是中国第一个Fc段修饰，生产工艺优化，具有更强ADCC（抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用）效应的创新抗HER2单抗，与化疗药物联合，已被证明可以延缓HER2阳性的转移性乳腺癌患者病情进展，并带来生存获益。
赛普汀的获批，续写了这家国内创新药企在抗体药领域的记录，三生国健也成为国内目前唯一一家拥有三款治疗性抗体类药物的创新生物药企。
首个中欧双批的国产单抗生物类似药
2019年，是中国生物类似药的“元年”。复宏汉霖的汉利康®（利妥昔单抗注射液）获批上市，成为中国批准的第一款生物类似药。
2020年8月，复宏汉霖宣布其自主开发和生产的第二款生物类似药、曲妥珠单抗汉曲优®（HLX02，欧盟商品名：Zercepac®）正式获NMPA批准上市。7月27日，该药已获欧盟委员会（European Commission，EC）批准上市登陆欧洲市场，由此成为首个中欧双批的国产单抗生物类似药，开启了中国生物医药研发成果的国际化新篇章。
首个国产ADC提交上市申请
CDE官网在8月26日披露，荣昌生物靶向HER2的ADC药物注射用纬迪西妥单抗（Disitamab vedotin, RC48, 商品名：爱地希）上市申请拟纳入优先审评审批程序。这意味首款国产ADC提交了上市申请，超越了国内其他ADC玩家。单抗技术历经数十年的发展，目前已经日趋成熟，也成为全球医药市场炙手可热的领域。据弗若斯特沙利文数据，全球单抗市场规模在2016年就已增至千亿美元级别。在2019年全球销售额前二十的药品中，13个生物药中单抗就占据了9席，其中，艾伯维的抗TNFα单抗Humira（阿达木单抗,商品名：修美乐）更是连续8年蝉联销售冠军。
谈及单抗，就必定少不了PD-1/L1单抗药物。全球知名数据分析公司GlobalData发布的报告指出，默沙东的明星药物Keytruda将超越修美乐以225亿美元的销售额登上《2025年全球最畅销药物》的榜首。事实上，Keytruda销售额在2018年首次实现超越Opdivo后，2019年首次突破百亿美元大关，达到111亿美元，已经跻身2019年全球药物销售额TOP3。而在国内，距离首款国产PD-(L)1获批上市已愈一年。前段时间，拥有商业化PD-1产品的公司陆陆续续公布了其2020年第二季度财务业绩报告。恒瑞医药、信达生物、百济神州、君实生物这四家药企的PD-1药物销售额已超35亿元。在国内6款 PD-1产品中，恒瑞医药卡瑞利珠单抗（艾瑞卡）成为中国最畅销的同类药物，该药上半年销售额超过20亿元，超越了默沙东的Keytruda和百时美施贵宝的Opdivo在国内的销售额。
近年来，随着国内政策、监管、资本环境的一片向好，中国药企纷纷涌入抗体生物类似药及创新药的研发行列。
为了更好地保证安全性和有效性，建立高效、稳定、可信的分析方法已成为抗体药物研发的关键环节。与此同时，分析方法的标准化和先进性是衡量抗体药物研发企业的能力的重要标准之一。在抗体药物开发过程中，通常需要在早期研发阶段通过物理化学、结构和功能等分析途径确定候选抗体药物的关键质量属性（CQA），以加速研发进程，减少风险。结构和功能表征的研究越全面和越稳健，则选择用于动物和/或临床试验的针对性方法从科学角度而言也会越合理。针对单抗生物类似药，开发者必须使用先进分析技术从开始开发到最终对原研药物的CQA进行严谨全面的分析，以确定候选药与参照药的整体相似性。针对创新型单抗，更先进的质量分析检测方法是确保产品安全性和有效性的保证，也有利于加速研发进程以获得后期的市场占有率。作为复杂的大分子蛋白质，分子特性和功能是单抗药物的CQA。下图左侧列举了可以用来仔细评估这些CQA的一系列物理化学和生物学方法。除了一般的分子表征外，下图右侧和底部面板中还列出了部分与功能相关的分析方法。▲ 分子结构分析和功能评估方法概述（图片来源：Protein Cell）
单克隆抗体（mAb）的功能评估
• 平衡解离常数：抗体-抗原（Ab-Ag）相互作用对于mAb的功能至关重要。作为Ab-Ag相互作用的关键参数，平衡解离常数（也称为KD值）可用于预测某些条件下的相互作用状态。基于不同的机理，基于表面等离子共振（SPR）的技术、荧光ELISA（FL-ELISA）和KinExA通常用于确定KD值。
• 配体结合测定(体外效价测定)：与体内分析不同，体外结合活性被用作替代方法来分析mAb候选物。需要稳定且可溶的抗原来代表mAb的体内靶标。此外，通过使用氢氘交换质谱或其他方法，可以很好地确定由mAb识别的关键表位。作为一种替代方法，配体结合测定可用于早期开发阶段，甚至生命周期管理阶段。ELISA和基于SPR的技术是两种最流行的配体结合分析方法。
• 基于细胞的效价分析：尽管配体结合试验可以很容易地进行，且具有理想的精确性和准确性，但其作用机制可能涉及配体结合后的下游事件。因此，仅测量结合活性可能不能忠实地反映mAb的效价。例如，不同靶点的mAb通常会诱导早期反应（信号通路）或晚期反应（增殖、细胞因子）。因此，产品的效价应该基于对mAb作用机制的理解，通过细胞水平来评估。此外，与配体结合试验相比，细胞生物试验可以检测化学修饰的影响。
• 效应功能分析：众所周知，抗体由抗原结合部位（Fab）和可结晶部位（Fc）构成。Fab段可以与特定的抗原结合，由此决定抗体的特异性和亲和力；而Fc段则决定抗体的效应功能，包括抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用（ADCP），以及补体依赖的细胞毒性作用（CDC）。治疗性抗体可以多种方式起作用，它们的临床疗效通常取决于Fab和Fc介导的生物学功能的组合。许多基于mAb的产物靶向细胞表面的可溶性受体或细胞因子，从而触发复杂的下游信号传导事件。对于候选分子，在开发过程中应进行效应功能的充分研究，包括ADCC、CDC和ADCP。由于抗体药物的复杂性和固有的异质性，应仔细进行广泛的生物物理、生化、生物学、免疫化学和免疫学表征。此外，对于其他形式的基于mAb的生物制剂，例如抗体药物偶联物（ADC）和双特异性抗体，这些分子的分析原理通常与传统mAb是一致的，但也有一些必须设计的特定属性，例如ADC药物需要进行药物抗体比（DAR）和分布评估。国内抗体药物领域在今年迎来的一系列里程碑事件也表明了该领域的繁荣，基于行业发展的需求，建立高效、稳定、可信的分析方法显得尤为重要。全球科学服务领域的领导者赛默飞近期推出了抗体药物研发赋能方案，其中针对抗体的功能分析，能够提供全面可靠的解决方案，助力药企的抗体药物早期开发。抗体效价测定和效应功能分析是确保抗体药物有效性的重要质控指标，Thermo Scientific™ Varioskan LUX™ 多功能酶标仪作为通用检测平台，可用于多种方式检测。特别地，赛默飞开发的Invitrogen荧光标记新方法让ADC检测“眼见为实”。基于细胞的效价分析可更忠实地反映抗体药物可能引起的免疫反应及细胞功能变化，赛默飞旗下的流式平台和高内涵平台可全面覆盖此类检测。
另外，考虑到2D细胞模型的局限性，类器官和球状体等3D细胞模型更便于在生理学相关背景下模拟生物学的复杂性。Thermo Scientific Nunc Nunclon Sphera表面超低吸附耗材现已被广泛应用在无支架的3D培养上，可帮助确保获得可控的实验结果。
抗体效价测定
Thermo Scientific™ Varioskan LUX™多功能酶标仪
作为通用检测平台，可进行包括光吸收、荧光、化学发光、时间分辨荧光、HTRF、 FRET、Alpha等多种方式检测。即可与Invitrogen即用型高敏ELISA试剂盒配合使用，也可与定制组装的特定免疫检测反应试剂搭配。赛默飞也提供定制的高质量耗材，ELISA底物，封闭液和抗体，以灵活制备所需检测。
高通量ELISA检测系统
Varioskan LUX检测平台
Invitrogen eBioscience ELISA试剂：涵盖免疫肿瘤，免疫球蛋白，神经生物学，细胞因子等领域
ADC检测
Invitrogen荧光标记新方法让ADC检测“眼见为实”
细胞表面受体与其特异性抗体结合时，可诱导发生受体介导的内吞作用，通常被作为靶向传递治疗用药物的载体进行研究。内化过程的效率与ADC的治疗指数直接相关。Invitrogen整合了强大的pHrodo™ iFL技术、Zenon™ 标记技术和SiteClick™ 抗体标记技术，提供便捷高效且易于使用的ADC筛选和鉴定工具。
细胞分析
Thermo Scientific™ HCS高内涵系统（药效评价+细胞功能）
CellInsight高内涵系统， 支持高通量快速分析3D细胞模型（多维层扫功能），多维评估药代及药效分析指标。再配合以Invitrogen多样化的检测方法和抗体，适用于细胞凋亡分析、细胞周期和 DNA修复、细胞活性与活力、细胞增殖等细胞功能检测， 这些检测分析多以荧光或比色为基础， 从而具有高灵敏性和便捷性。
流式细胞术整体解决方案（Attune + 免疫细胞分析）
流式细胞术可用于对于药物可能引起的免疫反应及细胞功能变化进行检测分析。我们专为实现高效能结果、节约实验室时间而设计，以此为细胞及其功能分析提供全方位解决方案。
Invitrogen™ Attune NxT 流式细胞仪：
• 高效—上样速度比传统流式细胞仪快10 倍
• 灵活—多达14 种颜色可供选择
• 创新—采用抗堵设计，可检测普通流式细胞仪难以处理的样品
• 简化—全血样品制备免洗免裂解，缩短操作时间
Invitrogen eBioscience 流式抗体试剂：
• eFluor 抗固定液染料
• Super Bright 超亮紫光染料
• 流式辅助试剂
• 适用于所有流式细胞仪
肿瘤3D细胞培养验证
相对于2D模型，类器官和球状体等3D细胞模型使我们有机会在生理学相关背景下模拟生物学的复杂性。使用3D细胞模型可以更好地模拟胞间作用和结构，更真实地反映出细胞在体内的生长环境，也可以更有效地模拟药物在实体瘤中的组织穿透过程，从而填补2D细胞模型和动物模型之间的差距，具有广泛的发展前景。
Thermo Scientific Nunc Nunclon Sphera
Thermo Scientific Nunc Nunclon Sphera表面超低吸附耗材，可以有效阻止细胞在耗材表面贴附，从而可以被广泛应用在无支架的3D培养上。配合圆底96孔板，能够做到可控培养细胞球体，而且可以通过改变接种细胞的密度来控制球体大小。细胞球体培养可以被广泛应用在胚胎干细胞，肿瘤细胞等细胞模型的构建上。选用Nunc超低吸附耗材，可以确保您从一开始就获得可控的实验结果。
Cancer 3D Spheroid App Note 提及的细胞培养试剂相关产品
作为未来生物药的主力军，抗体药物也是创新药研发的重中之重。随着单抗生物类似药进入收获期，创新型抗体的加速开发，多种类型的抗体药物有望得到广泛的临床应用。
功能验证是抗体药物研发的重要环节，只有更加全面和稳健的功能验证步骤，才能为进一步的临床前/临床试验的设计和评价提供必要信息，也从药学角度及早规避候选药物开发风险，从而降低开发成本。而在这过程中，全面可靠的解决方案将持续助力抗体药企的研发之路。
赛默飞抗体药高效表达和快速功能验证系列公开课 — 抗体免疫学功能研究解决方案及优化策略
本讲座内容主要包含了三部分：
☑ 治疗性抗体药物的发展现状；
☑ 治疗性抗体药物功能研究策略；
☑ 治疗性抗体功能验证的优化策略及案例分享。
参考出处：
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5777976/
多个重磅炸弹类似药提交上市申请 中国生物类似药进入黄金发展期
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