PCR实验室污染来源、防污染方法及应急处理方案
“PCR实验室”又叫基因扩增实验室，而PCR是聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)的简称，是一种分子生物学技术，用于放大特定的DNA片段，可看作生物体外的特殊DNA复制。当某种病原微生物中病毒极少时，传统的检测方法难以检出，但通过采用荧光定量PCR方法，可将病毒RNA片段扩增到百万倍以上，更容易被检测。
PCR实验室的污染来源
1、样本间交叉污染：
收集样本的容器被污染或样本密封不严外溢；不同样本移液时忘记更换枪尖或未使用带滤芯枪尖；移液器等实验器具及耗材未及时消毒灭菌；不同样本同时开盖或样本剧烈震荡、反复吹吸导致气溶胶形成扩散，相互交叉污染。
2、实验试剂污染：
主要是在PCR组分试剂加样过程中，由于移液器、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。加样过程中，因为PCR试剂对温度十分敏感，需要通过冰浴使得PCR试剂和PCR板/管处于0℃，但这个过程也是充满了污染的风险的。
3、扩增产物污染：
大量拷贝的产物泄漏或扩增后的PCR反应管意外开盖，这是PCR反应中最主要最常见的污染问题。因为PCR产物拷贝量大，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可形成假阳性。
4、克隆质粒污染：
作为阳性质控品的克隆质粒外溢。
PCR实验室的防污染方法
按照实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
1、严格执行各区功能划分：
试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
试剂准备区、样本制备区和扩增区内的实验用品，包括移液器等器具应专用，空气、物品流向依次为：试剂准备区、样本制备区、扩增区、产物分析区，不可逆行。
2、清洁的实验用品：
实验室自配试剂（去离子水、缓冲液等）和所有使用器具在使用之前均应高压灭菌或紫外杀菌。枪尖、反应管等实验耗材应一次性使用。
3、正确的实验操作：
实验应在超净工作台内进行，工作台内应放置PCR专用的微量离心机、各量程的移液器和其他必须物品。
实验的过程中选择最合适尺寸的手套并能及时更换，在进出不同实验区域或进行模板操作后都应更换实验服、口罩、帽子及手套，以避免不同实验区交叉污染。
装有PCR试剂的反应管在打开之前应先瞬时离心，将管壁及管盖上的液体离至管底，降低污染手套或加样器的风险；谨慎开启反应管，防止管内液体溅出或形成气溶胶导致污染。
吸加试剂和模板的操作应严格按照规范要求进行，遵守“慢吸快打”原则，尽量一次性完成，忌多次抽吸，以避免气溶胶产生的交叉污染。
PCR试剂建议小量分装，以减少反复冻融、重复取样次数；多样本PCR反应时，先配制反应混合液分装至反应管中，最后加入样本核酸，请勿同时开盖，尽量保证单人单管，实现完全闭管操作。实验试剂应与样品和PCR产物分开保存，不应放于同处。
PCR扩增实验完成后及时将反应管取出，用一次性手套将产物反应管包裹丢弃，保证管盖紧闭。
4、规范的实验设计：
应遵循实验室内部质量控制的相关规定，实验中设立阳性对照、阴性对照和空白对照，全程质控实验过程，验证PCR反应的可靠性，并协助判断扩增系统的可信性。
PCR实验室的污染应急处理方法
1、若核酸样本溢出：
立即用布或纸巾覆盖，由外围向中心倾倒10%的次氯酸消毒剂，约30分钟后，清除污染物品，再用次氯酸消毒剂擦拭，并用75%酒精喷洒，移动紫外车定点照射1小时。
2、其他不明情况污染：
1）暂停所有实验操作；
2）清理实验室内所有物品，寻找污染来源；
3）加大实验室的通风；
4）对实验室内所有表面（台面、地面及墙面） 进行消毒；
5）75%酒精空中喷雾；
6）开启紫外消毒装置，延长紫外照射时间（4小时以上）；
7）以上措施每日进行，直至污染消除；用新试剂及确认无污染的器材进行原污染项目的试剂空白检测，连续3次均阴性后方可进行常规检测。
PCR污染的范围很广，不同楼层也会产生影响，甚至会影响相邻建筑；PCR污染的时间很长，几个月甚至半年；PCR污染的影响很深，影响我们的生产计划，阻碍我们的研发进度，直接造成公司人力、财力的损失。但随着新技术和一些问题的明晰，无污染PCR检测的那一天离我们会越来越近！