SOP文件 | 丙氨酸氨基转移酶(ALT)速率法操作规程及临床意义

应用仪器：全自动生化分析仪   

原理：

底物L-丙氨酸与α-酮戊二酸在ALT作用下生成丙酮酸，生成的丙酮酸在乳酸脱氢酶（LDH）作用下转化成L-乳酸，同时伴随着NADH的氧化，引起在波长340nm处吸光度下降，下降速率与血清中ALT活力成正比。

组成成分：

溶液A

TriS缓冲液（PH8.5）……………………………0.1M

NADH………………………………………………0.30mM

LDH ……………………………………………… ≥5.0KU/L

溶液B

TriS缓冲液（PH7.0）……………………………0.1M

L-丙氨酸……………………………………………1020mM

α-酮戊二酸……………………………………… 36mM

标本：

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将血清标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、溶血标本不能检测。

工作液的配制：双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：340nm    比色杯光径：1cm

测量：相对于空气   反应温度： 37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	100μl
R3	50μl
标本	6.0μl

混匀，准确记录时间，放设定温度1分钟后，在波长340nm处，以蒸馏水校零，连续监测1-2分钟，计算△A/min。

计算：ALT（U/L） = △A/min × F

线性范围：0～1000U/L

较准品： 本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：本实验室采用省检验中心提供的质控血清。

参考范围：9～50U/L

注意事项：

1、本液体试剂按IFCC推荐法为基础设计，采用二步法，可防止胆红素的干扰。

2、试剂与样本量可按生化分析仪要求按比例改变。

3、本试剂线性可达到1000U/L。当样本中ALT活力超过1000U/L时，可用生理盐水稀释，即0.1ml血清加0.2ml生理盐水，再测定，结果乘以3。

4、如试剂变混浊，或以蒸馏水为空白，试剂工作液在340nm处吸光度小于1.0，请勿使用。

临床意义：

丙氨酸氨基转移酶（ALT）又称谷丙转氨酶（GPT）主要存在于机体组织细胞中，但以肝细胞含量最多，其次为心肌、脑和肾脏组织中；在肝细胞ALT则主要存在于肝细胞质中，少量存在于线粒体内，其肝内活性较血清高100倍只有极少量释放入血液中，所以血清中此酶活性很低，当这些组织病变时，细胞内的酶大量释放入血液中，使血清中该酶的活性增多。ALT测定对肝炎的诊断，疗效观察和预后估计具有重要价值。

1、急性肝炎显著升高，尤其对无黄疸，无症状肝炎的早期诊断更有帮助，其阳性率高，阳性出现时间较其他试验早，其活性的高低随肝病的进展和恢复而升降，据此可观察病情及预后。ALT持续处于高水平或反复波动，表示病变仍在进行或转为慢性肝炎。若黄疸加重，ALT反而降低，即所谓的“胆酶分离”现象，常是肝坏死的先兆。

2、急性肝炎，肝硬化，肝癌等ALT活性轻度升高。

3、胆道疾病，心肌和骨骼肌损伤也可引起ALT升高。

4、应用某些药物如氯丙嗪，异烟肼，利福平等及非肝胆疾病也可暂时性轻度至中度升高。

各种肝炎的急性期、肝癌、肝硬化、心肌梗死、心肌炎及胆道疾病等此酶活性显著增高。

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