SOP文件 | 乳酸脱氢酶(LDH)速率法操作规程及临床意义

应用仪器：全自动生化分析仪    

原理：

通过乳酸脱氢酶催化反应，使NAD⁺转化为NADH，从而引起在波长340nm处吸光度的上升，上升速率与样本中LDH活力成正比。

组成成分：

溶液A

TriS-HCL缓冲液（PH9.3）…………300mM

L(+)乳酸理……………………………100mM

防腐剂………………………………… 适量

溶液B

MES（PH5.5）……………………… 50mM

NAD  ……………… ………… ……30mM

防腐剂………………………………… 适量

标本： 

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：340nm     比色杯光径：1cm

测量：相对于空气    反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	240μl
R2	60μl
标本	10.0μl

混匀，准确记录时间，放设定温度1分钟后在波长340nm处，以蒸馏水校零，连续监测1-3分钟，计算△A/min。

计算：LDH（U/L） = △A/min × F

线性范围：0～1000U/L

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清

参考范围：15～220U/L

注意事项：

1、试剂与样本量可按生化分析仪要求按比例改变。

2、本试剂当LDH活力在0～1000U/L范围内，线性良好。当样本中LDH活力超过1000U/L时，请用生理盐水稀释后再测定，结果乘以稀释倍数。

3、如试剂变混浊，或以蒸馏水为空白，在340nm波长处试剂吸光度大于0.60，请勿使用。

4、试剂中含有叠氮钠，切勿吞食，避免与皮肤或粘膜接触。

临床意义：

乳酸脱氢酶催化乳酸和丙酮酸之间的相互转化。在碱性条件下，促进乳酸向丙酮酸转化。在正常情况下，血清中此酶活性比细胞组织中低1000倍，当有少量组织坏死时该酶释放入血液中使其在血液中的活性增高。

LDH测定常用诊断心肌梗死，肝病和某些恶性肿瘤。

1、心肌梗死：

发病10-12h升高，24-48h达高峰，8-9d后恢复正常。与CK相比，虽然酶活性出现较迟，阳性率较低，但持续时间长，且活性增高的程度与心肌梗死的病情密切相关，梗死范围越大，其酶活性越高。若LDH增高后恢复迟缓，或在病中再次增高，提示梗死范围扩大，预后不良。

2、肝脏疾病：

急性肝炎或慢性活动性肝炎LDH常显著或中度升高。其敏感度略低于ALT。肝癌时LDH活性明显升高，尤其是转移性肝癌增高更显著。可达1000U/L。

3、血液病：

白血病，巨幼红细胞贫血，恶性淋巴瘤等LDH活性升高。

4、其它：

营养不良，横纹肌损伤，胰腺炎，肺梗寒等LDH活性也升高。

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