SOP文件 | 碱性磷酸酶(ALP)AMP缓冲液法操作规程及临床意义

应用仪器：全自动生化分析仪    

原理：

无色的磷酸对硝基苯在碱性磷酸酶的作用下，生成在405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。通过测定在405nm处吸光度的变化速率不计算ALP的活性。

组成成分：

溶液A

AMP缓冲液（PH10.50）…… 1.0M

氯化镁 ………………………0.5mM

溶液B

AMP缓冲液（PH8.85）………1.0M

磷酸对硝基苯……………… 60.1mM

氯化镁 …………………… 0.5mM

标本：

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：405nm       比色杯光径：1cm

测量：相对于空气    反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	200μl
R2	50μl
标本	4.0μl

混匀，准确记录时间，放设定温度1分钟后在波长405nm处以蒸馏水校零，连续监测3分钟，计算△A/min。

计算：ALP（U/L） = △A/min × F

线性范围：0～700 U/L

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清

参考范围：53～140U/L

注意事项：

1、试剂与样本量可根据生化分析仪要求按比例改变。

2、本试剂线性可达700U/L，若每分钟吸光度变化值大于0.20，则以0.1ml样本加0.5ml生理盐水稀释，再测定，结果乘以6。

3、如试剂空白吸光度值大于0.6或试剂变混浊，请勿使用。

贮存条件与有效期：

试剂于2℃～8℃避光保存，有效期为1年。

临床意义：

碱性磷酸酶（ALP）几乎存在于人体的各个组织中。正常人血清中的ALP主要来自骨骼，由成骨细胞产生。故骨骼疾病，特别是当有新骨质生成时，和正在生长的儿童期，血液内的ALP活性增高。因为酶由肝脏排泄，且有部分酶来自肝脏，故肝胆疾病特别是胆道堵塞时ALP活性增高。

1、阻塞性黄疸：

肝内，外阻塞性黄疸患者因胆汁排泄不畅，ALP滞留于血中而增高，其增高的程度与梗阻的程度，持续的时间呈正比。

2、伴有黄疸的急，慢性肝炎，肝硬化，肝坏死等：

ALP活性也增高，一般认为，肝细胞性黄疸患者ALP持续低水平升高，若胆红素逐渐升高，而ALP降低，提示肝细胞严重受损。反之，则说明肝细胞逐渐恢复。严重弥漫性肝损伤时，ALP活性降低。

3、肝癌：

约半数原发性肝癌和90%转移性肝癌ALP升高，在肝病中升高最为显著。无黄疸患者ALP异常升高应警惕肝癌的可能。其他肿瘤ALP亦可升高。

4、骨骼系统疾病：

骨软化症，佝镂病，骨折恢复期等，因ALP生成亢进，使ALP活性升高。

5、ALP活性降低：

常见于克汀病，维生素C缺乏症，磷酸酶过少症。偶见于甲状腺功能减退，恶性贫血和营养不良。

有用，就点一个“在看” 吧戳原文，检验医学推荐用书！