SOP文件 | 肌酸激酶同功酶(CK-MB)速率法操作规程及临床意义

应用仪器：全自动生化分析仪    

原理：

本法为比色测定CK-MB活性的免疫抑制酶动力学方法在抗CK-MB亚单位抗体存在的条件下，标本中的全部CK-MM活性和50%的CK-MB活性被抑制，而CK-MB和CK-BB中B亚基的活性则不受影响，将CK-B活性测定值乘以2倍即得CK-MB活性。反应式如下：

组成成分：

溶液A

咪唑缓冲液（PH6.7）…………100mmol/L

磷酸肌酸…………………………30mmol/L

D-葡萄糖果………………………20mmol/L

EDTA……………………………2mmol/L

AMP………………………………5mmol/L

ADP………………………………2mmol/L

NADP………………………………2mmol/L

乙-葡萄糖………………………10mmol/L

N-乙酰半胱氨酸（NAC）………20mmol/L

已糖激酶（HK）…………………≥2.5KU/L

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶……………≥1.5KU/L

溶液B

咪唑缓冲液（PH8.5）…………100mM

磷酸肌酸………………………30mmol/L

标本： 

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：340nm       比色杯光径：1cm

测量：相对于空气      反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	120μl
R3	30μl
标本	6.0μl

混匀，准确记录时间，放设定温度2分钟后在波长340nm处，以蒸馏水校零，连续监测5分钟，计算△A/min。

计算：CK-MB（U/L） = △A/min × F

线性范围：0～1500U/L

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清

参考范围：0～25U/L

注意事项：

1、试剂与样本量可根据生化分析仪要求按比例改变。

2、本试剂在37℃测定时可抑 ≥2000U/L CK-MM活性，如果37℃时测定的总CK活性>1000U/L，应将样品作适当稀释，测定后结果乘以稀释倍数，这样CK-MB的百分比才会有价值。

3、本测定还包括血清中的CK-BB同功酶，一般情况下可忽略不计，但若CK-BB活性较高，则测定的CK-MB活性值将偏高。

4、现已发现有一种大分子免疫球蛋白BB，它的B亚基也能用本法测出，若测定的CK-MB活性大于总CK活性的20%，就应怀疑有这种BB大分子存在的可能。

临床意义：

肌酸激酶同工酶在诊断急性心肌梗塞时有特异性，结合心肌酶图谱，有助于心肌梗塞的诊断。

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