生化SOP文件 | α-羟丁酸脱氢酶(α-HBDH)速率法操作规程及临床意义

应用仪器：全自动生化分析仪    

原理：

通过α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDH）催化反应，使还原型辅酶I（NADH）转化为氧化型辅酶I（NAD⁺），从而引起在波长340nm处吸光度的下降，下降的速率与样本中α-HBDH的活力成正比。

组成成分：

溶液A

磷酸盐缓冲液（PH7.45）…………………………100mM

α-酮丁酸 …………………………………………4.4mM

叠氮钠…………………………………………… 0.2g/L

溶液B

磷酸盐缓冲液（PH9.1） …………………………50mM

还原型辅酶I………………………………………1.27mM

叠氮钠…………………………………………… 0.2g/L

标本： 

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：340nm       比色杯光径：1cm

测量：相对于空气     反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	192μl
R2	48μl
标本	8.0μl

混匀，准确记录时间，放设定温度1分钟后在波长340nm处，以蒸馏水校零，连续监测1-3分钟，计算△A/min。

计算：α-HBDH（U/L） = △A/min × F

线性范围：0～1000U/L

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清

参考范围：72～182U/L

注意事项：

1、试剂与样本量可按生化分析仪要求按比例改变。

2、如试剂变混浊，或以蒸馏水为空白，试剂工作液在340nm处吸光度小于1.0，请勿使用。

临床意义：

α-羟丁酸脱氢酶的活性定义为：当用α-酮丁酸作为底物时所获得的乳酸脱氢酶（LDH）的活性。LDH-1较其它同工酶对α-酮丁酸有更大的亲合力，因此当用α-酮丁酸作为底物时，含LDH-1多的组织如血清、心肌、红血球等就具有较高的活性，即α-HBDH活性高；而肝、骨胳肌等具有较低的活性，即α-HBDH活性低。常用α-HBDH来测量血清中LDH-1的活性。α-HBDH与LDH、GOT、CK、CK-MB一起构成了心肌酶谱。

1、心肌梗死：

此时α-HBDH活性明显升高，且维持时间较LDH长，LDH/α-HBDH比值（0.8-1.2）低于正常对照（1.2-1.6）.

2、鉴别肝病和心脏病：

肝病和心脏病时LDH均可升高，但肝病时α-HBDH活性变化不大，LDH/α-HBDH比值可升高至1.6-2.5，而心脏疾病时α-HBDH则明显升高。

3、营养不良，叶酸和维生素B12缺乏时，α-HBDH活性亦可升高。

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