生化SOP文件 | 载脂蛋白A-1(APOA-1)免疫比浊法操作规程及临床意义

应用仪器：

全自动生化分析仪    

原理：

APOA-1与特异的抗血清反应形成不溶性的复合物，可在340nm波长处测定该不溶性复合物的浊度。通过测定标准品，建立一个吸光度对APOA-1浓度的标准曲线就可以测定出样品中的APOA-1浓度。

组成成分：

溶液A： 

聚乙二醇…………………………<4%

氯化钠……………………………106mmol/L

Tris/HCL缓冲液…………………15 mmol/L

溶液B： 

抗人APOA-1抗体

表面活性剂

标准液（冻干品）：

多点定标：每瓶冻干品加标签所示蒸馏水复溶，静置20分钟后使用，按下表加蒸馏水稀释，形成多点定标。

管号	1	2	3	4	5
稀释比例 （标准原液∶水）	蒸馏水	1∶3	1∶1	2∶1	原液
APOA-1浓度	0.00	X/4	X/2	2X/3	X

复溶后标准液在2-8℃可保存一周，-20℃可保存2个月。

标本：

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、在采血前，至少2周内保持一般饮食习惯和体重稳定，测定前24小时内不应进行剧烈体育运动。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果24内不能完成检测即应将标本放入4℃冰箱保存一周，-20℃可保存数月。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：340nm      比色杯光径：1cm

测量：相对于空气     反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	260μl
R3	65μl
标本	2.0μl

混匀后，37℃水浴5分钟，在波长340nm处比色，以空白管校零，读取样本管与标准管的吸光度。A_标准、A_样本。 

线性范围：0～2.4g/L

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清。

参考范围：1.0～1.6g/L

注意事项：

1、如采用预稀释功能，请与厂家联系。

2、该反应类型也可选用终点法进行测试。

3、建议各实验室建立自己的正常范围。

4、结果如超过线性范围，请用生理盐水将标本按1∶1稀释，测定结果乘2。

5、如仪器内无所提供波长的滤光片，选择波长接近的滤光片数值输入。

贮存条件与有效期：

1、原包装试剂储存在2℃～8℃至标签所示失效日期。

2、溶液A、B开封后，2℃～8℃稳定15天。

临床意义：

载脂蛋白Ａ-１是高密度脂蛋白（HDL）的主要形式。

载脂蛋白Ａ-１的主要作用是激活卵磷脂胆固醇脂肪酰基转移酶（LCAT）和从肝外组织清除游离胆固醇。

载脂蛋白Ａ-１是一个抗动脉粥样硬化的指标。目前的研究结果显示APOA-1水平与冠心病发病呈负相关，与APO-Ｂ呈正相关，冠心病患者一般具有比较低的APOA-1水平和比较高的APO-B水平。

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