生化SOP文件 | 补体C3免疫比浊法操作规程及临床意义

应用仪器：

全自动生化分析仪    

原理：

在340nm以终点法监测抗原、抗体反应。

组成成分：

溶液A：

PEG4缓冲液

含高分子强化剂的磷酸盐缓冲液

含有0.095%的叠氮化钠。

溶液B：

C3抗血清

含有0.095%的叠氮化钠。

标本：

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：340nm      比色杯光径：1cm

测量：相对于空气     反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	260μl
R3	65μl
标本	2.0μl

用900μL PEG4缓冲液（R1）混合5μL稀释过的标本或标准液。读取在340nm处的标本和标准液的吸光度（OD1）。加入180μL的C3抗血清（R3）。在37℃下放置5分钟。读取在340nm处的标本和标准液的吸光度（OD2）。

计算：

计算吸光度的差值（OD2-OD1），并建立标准液吸光度—浓度工作曲线。计算标本的吸光度差值，并在工作曲线上读取浓度值。如标本的吸光度值大于标准液的最大值，则需稀释标本后，重新测量。

线性范围：

0～10g/L

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清。

参考范围：

0.75～1.35g/L

注意事项：

1、标准液所用的物质对HIV抗体，乙型肝炎表面抗原和丙型肝炎抗体测试呈阴性反应。

2、建议各实验室建立自己的正常值范围。

3、测量的特征值（测量范围、精度、准确度、灵敏度）和多种分析仪的参数我们将另外提供。

4、试剂中含有叠氮钠，避免眼睛可皮肤接触。如有接触，用大量水冲洗。

贮存条件与有效期：

1、原包装试剂2℃～8℃储存至标签所示失效日期。

2、避免污染，试剂在仪器中可稳定至少30天，不要冷冻。

临床意义：

补体C3是典型和替换补体的核心。它是补体C5转化酶的成分之一。

C3的激化分裂的产品具有重要的生物功能。C3b是一种在免疫系统中起作用的调理素。C3a是一种过敏毒素和化学毒素。

C3水平的升高常见于急性发炎症状。其水平的降低常见于并发症，免疫系统因发热病菌引起的反复感染，多种肾小球肾炎，和先天免疫缺陷。

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