生化SOP文件 | 乳酸(LAC)酶显色法操作规程及临床意义

应用仪器：

全自动生化分析仪

原理：

乳酸氧化酶氧化乳酸生成丙酮酸和过氧化氢，过氧化氢与4-氨基安替比林、对氯苯反应生成红色醌式染料，此染料在546时波长处有最大吸收峰，吸收强度与血清中乳酸含量成正比。

组成成分：

Tris缓冲液（PH7.5）……………………………50.0mmol/L

4-氨基安替比林………………………………… 0.4mmol/L

对氯苯酚 …………………………………………6.0mmol/L

乳酸氧化酶 ………………………………………>0.2KU/L

过氧化物酶 ………………………………………>2.0KU/L

表面活性剂和稳定剂…………………………… 3.0%

乳酸标准液：30mg/dl

标本：

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：546nm      比色杯光径：1cm

测量：相对于空气     反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	200μl
标本	2.0μl

样本 + 试剂在37℃保温5分钟后，以试剂空白调零，测定吸光度值A。

计算：

线性范围：

0～150mg/dL

较准品：  

本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：

本实验室采用省检验中心提供的质控血清。

参考范围：

12～16mg/dL

注意事项：

1、建议各实验室建立自己的正常值范围。

2、结果如超过线性范围，请用生理盐水将标本按1∶1稀释，测定结果乘2。

3、如仪器内无所提供波长的滤光片，选择波接近的滤光片数值输入。

贮存条件与有效期：

1、原包装试剂储存在2℃～8℃至标签所示失效日期。

2、如试剂出现混浊则表明试剂失效。

临床意义：

组织严重缺氧可导致三羧酸循环中丙酮酸需氧氧化的障碍，丙酮酸还原成乳酸的酵解作用增强，血中乳酸与丙酮酸比值增高及乳酸增加，甚至高达25mmol/L。这种极值的出现标志着细胞氧化过程的恶化，并与显著的呼吸增强、虚弱、疲劳、恍惚及最后昏迷相联系。即使酸中毒及低氧血症已得到处理，此种高乳酸血症常为不可逆的。见于休克的不可逆期、无酮中毒的糖尿病昏迷和各种疾病的终末期。

在休克、心失代偿、血液病和肺功能不全时，常见的低氧血症同时有高乳酸血症，在低氧血症及原发条件处理后常是可逆的。在肝脏灌流量降低的病例，乳酸由肝的移除显著降低，会出现乳酸酸中毒。 

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