细说酵母菌的血细胞计数板直接计数法

血细胞计数板简介

血细胞计数板又叫血球计数板。被用以对人体内红、白血球进行显微计数之用，也常用于计算一些细菌、真菌、酵母等微生物的数量，是一种常见的生物学工具。

血球计数板的规格一般有两种2mm×2mm和1mm×1mm，但是无论哪种规格血球计数板的使用原理和方法是相同的。

血细胞计数板的构造

血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面各有一个方格网。每个方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。也就是说一个血细胞计数板有两个计数室。

实物图正面观

血细胞计数板的规格

血细胞计数板的规格一般有两种：2mm×2mm和1mm×1mm，但是无论哪种规格血球计数板的使用原理和方法是相同的。

2mm×2mm规格的是大方格的长和宽各2mm深度为0.1mm其容积为0.4mm3；规格1mm×1mm的是大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3

下面以规格为1mm×1mm为例进行介绍

计数室的构造

计数室的刻度有两种：一种是计数室（中间的大方格）分为16个中方格（中方格用三线隔开），而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个计数室分成25个中方格（中方格之间用双线分开），而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数室都由400个小方格组成。 计数室边长为1mm，则计数区的面积为lmm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 

符号和数字的含义

在血球计数板上，刻有一些符号和数字(如图)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板的计数室（大方格）分25个中格；0.1mm为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室平均分为400个小格，每小格面积是1/400 mm2。说明了此计数室的面积是1mm2，也就是说此计数器的规格是1mm×1mm

计数

16×25型的计数板

将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数

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例一                                     

1大格=16中格 =16 × 25小格 =400小格

25×16型的计数板

中央大方格以双线等分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格，供细胞计数用（见图三）。一般计数四个角和中央的五个中方格（80个小方格）的细胞数。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算：

酵母细胞个数／1mL ＝80个小方格细胞总数/ 80 ×400×10000×稀释倍数

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例二

1大格=25中格=25 × 16小格=400小格

结果记录血细胞计数板的清洗

血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷。洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。

说明

上面介绍的是使用中央大方格进行的计数，实际上，不同的细胞计数采用不同的方格，不然其他方格不是浪费了吗？

酵母菌、细菌等微生物和红细胞计数，在中央大方格内选择4或5个（根据不同规格）中方格为样方来计数。

白细胞应选四角大方格为样方计数。

动物细胞计数选四角大方格或四角大方格和中央大方格作为样方来计数。

例题：

1.通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先______________ 后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有______________个。

（参考答案：稀释；2×108）

2. 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0．1 mm3。

现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻______________个／mL。 

（参考答案：5n×105  ）

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