世界首例PD1敲除非病毒定点整合CART治疗淋巴瘤取得突破性成果

前言

2020年9月25日，聚焦于基因治疗和细胞药物研发公司上海邦耀生物科技有限公司（“邦耀生物”）宣布，首次对外公布了与浙江大学医学院附属第一医院合作开展的“PD1敲除非病毒定点整合CD19-CART细胞治疗复发难治性非霍奇金淋巴瘤的临床试验”取得突破性成果。这是世界上首次利用基因编辑技术在PD1位点实现定点整合的CART治疗，也是全球首例非病毒定点整合CART细胞治疗淋巴瘤的临床试验。同时，最新研究成果已于2020年9月23日在预印本平台medRxiv上公布，由华东师范大学、浙江大学医学院附属第一医院和上海邦耀生物共同完成。

PD1定点整合的CD19-CART是邦耀生物利用自主知识产权的Quikin CART™平台技术，在不使用病毒载体的情况下，一步制备获得的CART产品。该产品将PD1免疫检查点抑制和CART肿瘤杀伤功能合二为一，起到了PD1免疫治疗与CART疗法联合应用的效果。

2例患者在治疗3个月后完全缓解

该临床研究计划入组患者15例，目前已可评估的4例患者在1个月时均达到了部分缓解（PR）的效果，已经达到3个月评估时间的2例患者获得完全缓解(CR)。

首例获得完全缓解的患者于2018年诊断为弥漫大B淋巴瘤IVBE期，经多次放化疗治疗后，病情仍未得到有效控制。入组前影像学显示左下腹小肠走形区系膜间隙大小为3.6*3.5cm的病灶，放射性摄取异常增高。2020年5月入组进行PD1敲除非病毒定点整合CD19-CART细胞的回输治疗，治疗后28天PET-CT影像学即显示FDG代谢较前明显减低，达到PR，治疗90天后的PET-CT影像学显示病灶全部消失，FDG代谢未见增高，达到CR。

在整个CART治疗过程中未发生3级以上药物相关不良事件，包括细胞因子风暴和神经毒性。回输后，CART在体内扩增良好，持续时间较长，D90流式检测发现外周血中的CART细胞仍维持在一定比例。目前2例患者已经痊愈出院，仍在接受长期随访。

△患者治疗前后影像学检查对比

该项临床研究的主要研究者（PI）浙江大学医学院附属第一医院黄河院长说：“弥漫性大B细胞淋巴瘤是最常见的非霍奇金淋巴瘤，目前针对难治复发的患者缺乏有效治疗手段。今年我们开始探索基于基因编辑技术的非病毒定点整合型CART的临床研究，我们非常高兴的看到患者经过治疗后迅速达到完全缓解状态，我们期待这一新型的CART技术会为难治复发患者带来更加便捷、安全和确切的长期治疗效果。”

邦耀生物CART升级2.0版，更有效，更安全！

邦耀生物的非病毒定点整合CART技术(Quikin CART™)，可以在不使用病毒载体的情况下，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将CAR元件定点插入到基因组的特定位点，一步实现基因敲除和CAR的稳定整合，属于邦耀生物2.0版CART的管线产品。

PD-L1/PD1是抑制T细胞功能的重要免疫检查点，目前针对PD-L1/PD1的抑制剂已经在多种类型的恶性肿瘤中取得了良好的疗效，也有不少研究报道了PD1敲除可有效增强CART细胞的功能。非霍奇金淋巴瘤是一种原发于淋巴组织的血液系统恶性肿瘤，占所有淋巴瘤80%-90%，虽然患者在初次治疗后疾病得到缓解，但之后往往出现复发。虽然已有CART产品获批用于复发难治性非霍奇金淋巴瘤的临床治疗，但是总体疗效依然有限，而有研究提示抑制PD1通路可能会带来更好的临床效果。

因此，邦耀生物利用Quikin CART™平台开发了非病毒PD1定点整合CD19-CART细胞，开展复发难治性非霍奇金淋巴瘤的临床治疗。该产品具有CAR均一性稳定表达、PD1基因敲除的两大优势，相当于PD1抑制剂和CART细胞的强强联手。在目前已经开展的多例临床试验中，该CART产品体现了出色的安全性和有效性。

传统CART产品的制备主要使用病毒载体，对病毒制备工艺提出了很高的要求，这大大增加了CART细胞的制造成本和难度，阻碍了CART治疗的大规模临床应用；并且价格十分昂贵，如目前上市的CART产品，诺华的Kymriah定价为47.5万美元，Kite的Yescarta定价为37.3万美元；此外，由于病毒采用随机插入的方式将CAR元件整合到细胞基因组中，可能会改变正常基因的表达，存在癌变的安全隐患。Quikin CART™技术无需采用病毒载体进行细胞制备，极大减少了CART产品的生产成本，同时避免了随机插入的癌变风险。

Quikin CART™技术只需一步即可同时实现T细胞内源基因的调控和CAR的持续性表达。相比于其他CART技术，具有工艺简单、生产环节少、制备时间短、产品均一性高等优点。该技术平台可以用于多个免疫检查点敲除增强型CART细胞的制备，可以快速生产通用型CART细胞，可以开发动态调控的安全型CART产品等，为今后CART细胞的多样化改造提供了强有力的技术支持。

邦耀生物首席科学家，华东师范大学生命科学学院刘明耀教授表示：“与传统的自体CART技术相比，Quikin CART™技术可以在不使用病毒的情况下，一步实现CAR元件在基因组的定点整合和T细胞内源基因的调控干预。这意味着CART细胞的制备工艺、生产环节、制备时间都会大大简化和缩短，因此极大降低了CART细胞的生产成本，同时减少了病毒随机插入引起的致瘤风险，也提高了CART产品的均一性。目前结果显示我们制备的非病毒PD1定点整合CD19-CART细胞具有巨大的治疗潜力，在临床试验中表现出了很好的安全性和缓解率。”

该项目主要负责人、论文第一作者，邦耀生物创新CART研发总监，华东师范大学生命科学学院副研究员张楫钦博士说：“近年来，CRISPR/Cas9基因编辑技术的不断成熟和发展让我们萌生了将其应用于CART治疗的想法。通过对现有CART技术存在问题的深入剖析，我们意识到利用基因编辑技术来制备非病毒定点整合CART细胞是一个很有潜力的方向。通过大量的方法尝试和条件摸索，我们建立了成熟的Quikin CART™技术平台。该技术不需要使用任何病毒，只需一步即可制备出CART细胞，具有现有CART技术不可比拟的诸多优势。期待今后利用这一技术平台能开发出更多成功的CART产品，在临床治疗上取得更大的突破。”

据悉，除了正在开展的非病毒PD1定点整合CD19-CART临床研究，邦耀生物也正在布局针对实体瘤的其他非病毒定点整合CART产品，以期在CART疗法上取得更大的突破。

关于邦耀生物

上海邦耀生物科技有限公司致力于成为全球领先的基因细胞药企，邦耀生物以“以基因编辑引领创新，开发突破性疗法，造福全人类”为使命，依托自主研发中心及与华东师范大学共建的“上海基因编辑与细胞治疗研究中心”，过去5年已产生108项专利成果，有5个项目在8所知名医院开展IIT试验，其中3个项目进入IND申报阶段，并在Nature Biotechnology, Nature Medicine等国际知名期刊上发表了12篇高水平的学术论文。邦耀生物已搭建基因编辑、细胞治疗与基因治疗三大技术平台，并拥有6000平米GMP中试基地及近100人的运营团队，有力保障创新的研究成果能够快速转化与应用。邦耀生物通过患者需求和临床反馈不断推动研发产品快速更新迭代。在新商业文明时代的推动下，邦耀生物秉持开放、共享、共赢的态度，与全球创新生物医药生态链企业一起，加快推进创新药物的转化与落地，造福全球遗传疾病及恶性肿瘤患者！

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