洞察 | 分子诊断产业试剂盒全产品分析（二）

快速回看：分子诊断试剂盒全产品分析（一）

1. 原位杂交技术产品

原位核酸分子杂交技术简称原位杂交（ISH），是将分子杂交与组织化学相结合的一项技术。使用标记的DNA或RNA探针，在原位检测组织、细胞中存在的特定并且正在表达的核酸序列（基因）的方法。

80年代初，放射性同位素标记探针被大量应用。而自1988年以地高辛（dioxigenin,DIG）配体为主体的DIG检测系统问世以来，非同位素标记的原位杂交探针以其分辨敏感性高、耗时少——已成为原位杂交技术的重要标记手段。DIG检测系统使用地高辛（DIG）标记的探针与目标核苷酸序列结合，再应用HRP标记的抗地高辛抗体通过免疫组织化学方法在目标核酸原位形成带颜色的杂交信号，特异性地显示细胞中特定的DNA或RNA。目前，原位杂交技术已经广泛应用到科研临床等领域，并在分子诊断产业中，承担极为重要的角色。

截止10月15日，基于原位杂交技术的试剂盒产品，共计有43个产品，根据检测内容，大致可以分为三类，分别为肿瘤基因检测、病原体检测、染色体数目检测。其中有35个试剂盒与肿瘤疾病相关。下表为原位杂交技术的检测试剂盒的所有产品。

表1:43种基于荧光杂交技术的检测试剂盒详情

目前，国内共有11家企业拥有基于荧光杂交技术检测试剂盒的国家批文。其中益善生物11个，金菩嘉医疗10个，安必平医药6个，这三家公司占据了近63%的产品。并且这11家企业，有4家企业位于广东省，2家企业位于北京。其他5家企业主要分布在上海、武汉、厦门等发达城市。

在43个试剂盒中，有8个产品为HER-2基因检测，并且HER-2基因检测均采用荧光杂交技术，主要是因为《2008年NCCN乳腺癌临床实践指南（中国版）》、《中华抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2007版）》、《乳腺癌HER2检测指南》中指出，对于免疫组化结果不明确的患者，都需要应用FISH检测来确定。目前HER-2已经成为评定乳腺癌预后的重要指标之一，并指导临床治疗方案的制定。研究发现HER-2基因扩增的乳腺癌患者的无病生存期率和总生存率显著低于无基因扩增患者。临床研究表明，HER-2基因扩增的乳腺癌患者接受曲妥珠单抗、拉帕替尼、帕妥珠单抗以及T-DM1等靶向药物的治疗效果较好，无进展生存期和生存期能显著延长。

其中4个产品为EGFR基因检测，主要企业为益善生物、金菩嘉医疗和安必平医药三家公司生产。目前，临床表明大多数非小细胞肺癌的发生和发展依赖于活化的EGFR基因，EGFR基因发生扩增和突变均可引起相应的络氨酸激酶活化，导致肿瘤的发生和发展。针对络氨酸激酶抑制剂类药物可以显著改善非小细胞肺癌患者的预后，前提是明确患者EGFR基因的改变情况。除非小细胞肺癌外，EGFR还与结直肠癌、头颈鳞癌、胃癌、食管癌等多种肿瘤相关。

关于TOP2A基因检测的试剂盒也有四个，分别由北京金菩嘉医疗（1个）、益善生物（1个）和安必平医药（2个）生产。目前，对于乳腺癌患者来说，检测TOP2A基因的状态是判断预后、指导临床合理用药的重要标准。因为研究表明，TOP2A基因异常的患者无复发生存期（RFS）缩短，预后差，尤其是TOP2A基因缺失的患者预后更差。TOP2A基因异常的患者接受蒽环类药物的化疗方案效果要优于TOP2A基因正常的患者，TOP2A异常的患者使用CEF方案(环磷酰胺+表阿霉素+氟尿嘧啶，其中表阿霉素为蒽环类药物)进行治疗可降低65%的复发风险和71%的死亡风险，而TOP2A正常的患者使用此方案只能降低6%的复发风险和10%的死亡风险。

2. 小结

目前基于原位杂交技术的检测试剂盒主要应用在肿瘤用药、病原体检测和染色体数目检测领域。其主要原因是原位杂交技术壁垒较低，在国内应用相对较广。并且，其灵敏度和特异性均可达到100%，除此之外，原位杂交技术操作简便，检测试剂可以进行预混合，所用探针也皆为即用型。并且试剂盒有强大的兼容性，无论是检测样本还是预处理试剂均可以满足检测要求。

参考资料：

• Kirsten Vang  Nielsen , Bent  Ejlertsen. The value of TOP2A gene copynumber variation as a biomarker in breast cancer: Update of DBCG trial 89D.Acta Oncologica. 2008.

• 2008年NCCN乳腺癌临床实践指南（中国版）

• 中华抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范（2007版）.《中国癌症杂志》，2007年第17卷第5期.

• EllisM J, Coop A, Singh B, et al.Letrozole inhibits tumor proliferation more effectively than tamoxifenindependent of HER1 /2 expression status. Cancer   Res. 2003.

• Cappuzzo F , Hirsch FR , Rossi E ,et al. Epidermal growth factor receptor ( EGFR) and HER - 2 gene amplificationpredict response to gefitinib therapy in advanced non - small cell lung cancer(NSCLC) . Ann Oncol .2004 .

•  5.David A. Eberhard, Giuseppe Giaccone, andBruce E. Johnson. Biomarkers of Response to Epidermal Growth Factor ReceptorInhibitors in Non–Small-Cell Lung Cancer Working Group: Standardization for Usein the Clinical Trial Setting.J Clin Oncol .2008.

文 | 魏洪泽

微信 | YoungmanWei

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