小鼠体外受精介绍

导读

近年来，基因工程小鼠模型已被广泛应用于科学研究，然而许多基因工程小鼠由于各种各样的原因出现了不能生育或濒临死亡等问题，这直接影响了科研工作的顺利进行。针对某些基因工程鼠繁育困难的问题，以体外受精为代表的辅助生殖技术受到广泛关注。1968年Whittingham最先报道了小鼠体外受精成功获得后代，经过半个世纪的努力，目前小鼠体外受精技术已日臻完善。下面，就跟着小编一起来了解一下吧。

进行体外受精可使用新鲜精子，也可使用冻存后复苏的精子，两种方法中鲜精的受精率较高，但是需要提供12-14w的健康雄鼠，将精子复苏进行体外受精可以不受活体鼠的限制，避免了饲养小鼠的麻烦。现将两种方法作一介绍。

鲜精体外受精：

1. 取4-5w雌鼠，下午5点腹腔注射5.0 IU的PMSG，48h后注射5.0 IU的HCG，然后准备受精液滴，获能液滴（均盖油），放于培养箱内过夜平衡。把ICR小鼠和结扎雄鼠合笼，第二天检假孕鼠。

2. 次日上午7点处死雄性小鼠，取出附睾，将附睾放入预先准备好的精子获能液中，用精细镊将精子团挤出完全后，把废弃的组织块挑出弃去，然后把精子获能皿放入培养箱中获能1h。

3. 取小鼠输卵管，用矿物质油将血渍清洗干净。在受精滴旁边油中，用精细摄将输卵管膨大部撕开，把“云雾团”引入受精滴中。

4. 精子获能结束后，把10μl精液加入受精滴，然后把培养皿放入培养箱中进行受精。

5. 6-7h后，将胚胎从受精滴中挑出，清洗干净，放入KSOM培养滴中培养，可当天看原核或者次日看2细胞胚胎的发育情况。

6. 取假孕鼠，每只假孕鼠移入15个胚胎，等待代孕鼠生产。

精子获能动态图

冻精体外受精

1. 取4-5w雌鼠，下午5点腹腔注射5.0 IU的PMSG，48h后注射5.0 IU的HCG，然后准备（用HTF做100μl的培养滴，覆盖矿物油），放于培养箱内过夜平衡。把ICR小鼠和结扎雄鼠合笼，第二天检假孕鼠。

2. 次日上午7点处死雌鼠，取小鼠输卵管，用矿物质油将血渍清洗干净。

3. 在受精滴旁边油中，用精细摄将输卵管膨大部撕开，将云雾团引入受精滴中。

4. 从液氮中取出脉管，在空气中停留40″，然后将脉管投入37℃水中，待冻存液融化，将含有精子的冻存液吹入解冻液中，3000r，离心3min，弃去上清液，得到精子。倒置显微镜下观察精子活力。将10μl精液加入受精滴中进行受精。

5. 6-7h后，将胚胎从受精滴中挑出，清洗干净，放入KSOM培养滴中培养，可当天看原核或者次日看2细胞胚胎的发育情况。

6. 取假孕鼠，每只假孕鼠移入15个胚胎，等待代孕鼠生产。

体外受精动态图

注意事项：

雌鼠注射HCG后，14-16h处死雌鼠，过早胚胎未成熟，过晚胚胎老化，都会影响受精率。

体外受精作为辅助生殖的一种，在很大程度上帮助基因工程鼠繁育，但是体外受精成功与否受许多因素的影响，比如小鼠的日龄（4w），试剂稳定性，取卵时间等，要想使受精率较高，还需要结合自己实验室的情况进行摸索。

精彩内容列表（持续更新，蓝色代表已经发表，黑色待发表）

2. 模式动物系列（二）基因编辑鼠

2.8  小鼠体外受精介绍

3. 模式动物系列（三）疾病动物模型

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