科研 | 澳门科技大学：基于大规模的化学蛋白组学的生物标志物定量和通路作图法来评价川楝素的肝毒性（国人佳作）

点击蓝字↑↑↑“微科享”，轻松关注不迷路

编译：微科盟红烧大肥鸥，编辑：微科盟Tracy、江舜尧。

微科盟原创微文，欢迎转发转载。

导读药物性肝损伤(DILI)是药物性肝损伤(DILI)的主要副作用，目前的研究方法有时不能准确评估，部分原因可能是药物或其反应性代谢物(RMS)与蛋白质的共价修饰。本研究以肝毒性化学物质川楝素(TSN)为例，建立了一种基于修饰氨基酸定量的快速、灵敏、特异的分析方法来评价药物共价修饰蛋白的肝毒性。TSN RM蛋白加合物在大鼠肝脏和血液中均与肝毒性的严重程度有良好的相关性。因此，血清中TSN RM蛋白加合物有可能作为肝毒性的微创生物标志物。同时，大规模的化学蛋白组学分析表明，TSN RMs在大鼠肝脏中至少修饰了84个蛋白质，生物信息学分析表明，TSN可能通过多靶点的蛋白质-蛋白质相互作用引起肝毒性，尤其是参与能量代谢的蛋白质。这些发现表明，我们的方法可以作为一种有效的工具来评估DILI并研究其可能的机制，特别是对于复杂的化合物。

论文ID

原名：Hepatotoxic evaluation of toosendanin via biomarker quantification and pathway mapping of large-scale chemical proteomics译名：基于大规模化学蛋白组学的生物标志物定量和通路作图法来评价川楝素的肝毒性
期刊：Food and Chemical Toxicology
IF：4.679发表时间：2021.05通讯作者：伍建林，李娜
通讯作者单位：澳门科技大学

实验设计

实验结果

1.TSN RM修饰蛋白体外定量方法的建立

修饰蛋白的定量是揭示TSN RM蛋白加合物与毒性关系的关键。因此，本研究首次建立了TSN RM修饰蛋白的定量方法如下。

首先，本研究使用我们之前开发的方法，通过TSN与人肝微粒体(HLM)的孵育生物合成了TSN RM-蛋白质加合物标准。经链霉蛋白酶E和胰凝乳蛋白酶水解后，我们用UHPLC-Q-TOF/MS分析TSN RM修饰的氨基酸，并检测到两种TSN RM-赖氨酸加合物(A1和A2)，与对照组相比其保留时间分别为5.41和5.54min。它们在m/z 719.34处有相同的分子离子([M+H]⁺)，与C₃₆H₅₀N₂O₁₃的元素组成相匹配，并且比TSN(C₃₀H₃₈O11)和赖氨酸(C₆H₁₄N₂O₂)之和少2H，MS/MS谱图进一步表明它们是赖氨酸偶合物。此外，有报道称TSN的代谢物(命名为T1)可以通过在TSN中的呋喃残基上加一个氨基与赖氨酸形成共价键，并通过NMR和MS鉴定了两个异构体，它们之间的区别只在于新形成的3-吡咯啉-2-酮部分的取代位置不同。此外，由于半缩醛基团的存在，半缩醛基团可以在溶液中再次开合，产生两个异构体，T1-赖氨酸结合物也可能形成两个异构体。因此，我们预测了TSN RM-赖氨酸加合物的结构。此外，在HLM存在下我们还检测到了TSN RM-半胱氨酸加合物，其分子离子([M+H]⁺)的m/z为652.2408，符合C₃₁H₄₁NO₁₂S的分子式。上述结果表明，链霉蛋白酶E和胰凝乳蛋白酶的结合可以从加合蛋白中释放出TSN RM修饰的氨基酸，这使得从释放的TSN RM氨基酸加合物中定量修饰蛋白质成为可能。由于TSN RM-赖氨酸加合物的丰度高于TSN RM-半胱氨酸结合物，因此接下来的定量方法是使用 HLM 释放的 TSN RM-赖氨酸加合物开发的。

其次，为了提高检测的灵敏度和特异性，我们建立了以上述酶解液为标准的UHPLC-QQQ/MS定量方法，随后对裂解电压、多反应监测(MRM)转换和碰撞能(CE)进行了优化。在裂解电压为170V时，m/z为719.3的前体离子强度最大；当在20、30、40和50 eV的离散碰撞能量下操作子离子扫描模式时，m/z为599.3的子离子是最丰富的碎片离子。然后我们在 15-40 eV 范围内梯度优化 719.3 → 599.3 的 MRM碰撞能量，结果表明 25 eV 效果最佳。与UHPLC-Q-TOF/MS相比，优化后的UHPLC-QQQ/MS方法可以明显降低HLM酶解液的背景干扰。此外，我们从经 TSN 处理的大鼠肝脏样品中成功检测到 TSN RM-赖氨酸加合物（图1A），并且在对照组中没有观察到相应的峰。但是，使用UHPLC-Q-TOF/MS方法无法在在大鼠肝脏中检测到相应的加合物（图1B)。这些结果表明，新开发的 UHPLC-QQQ/MS方法可用于动物模型中TSN RM修饰蛋白的定量。                

图1 (A)UHPLC-QQQ/MS对大鼠肝脏中TSN RM-赖氨酸加合物(m/z 719.3→599.3)进行多重反应监测(MRM)的色谱图；(B)采用UHPLC-Q-TOF/MS对TSN RM-赖氨酸加合物(m/z 719.3395)进行提取离子色谱图(EIC)。

第三，为了进一步提高灵敏度，本研究还对样品制备和酶解条件进行了优化。我们在从肝组织和血液中提取蛋白质时，发现蛋白质混合物的完全水解非常重要的。低离心力蛋白沉淀法和用于蛋白质沉淀重构的Qiagen TissueLyser II显示出良好的结果。此外，我们发现HLB共聚物固相萃取柱可降低肝组织和血样的基质效应。此外，我们还对动态酶解条件进行了优化：在加入这两种蛋白水解酶后的0、10min，2、10、15、20和25h时，我们在HLM中收集到等体积的TSN RM-赖氨酸加合物，且20h是获得较高TSN RM-赖氨酸加合物产量的最佳时间。

2.体内蛋白加合物与TSN所致肝损伤的相关性研究

为了研究TSN RMs体内形成的蛋白质加合物与肝毒性的关系，我们用新建立的方法测定了大鼠肝脏中的蛋白质加合物，即用α-糜蛋白酶和链霉蛋白酶E混合水解肝的蛋白质，然后进行UHPLC-QQQ/MS定量。我们在TSN处理组大鼠肝脏中可检测到赖氨酸加合物，而对照组大鼠肝脏中未检测到赖氨酸加合物。此外，TSN RM-赖氨酸加合物随剂量(3.75、7.5和15 mg/kg体重)的增加而增加(图2A)。在之前的研究中我们还发现常见的肝毒性标志物ALT活性也以剂量依赖的方式增加。肝毒性与蛋白质加合物呈正相关，表明TSN RMs对蛋白质的修饰可能是TILI的关键原因。

为了进一步证实修饰蛋白与肝毒性的关系，我们进行了时程实验，即分别于0、10、30min，1、2、4、8、12、24h时取肝组织，并采用UHPLC-QQQ/MS定量方法检测不同时间点大鼠肝脏中TSN及其赖氨酸加合物的含量，并用血清ALT活性评价其肝毒性。血清和肝脏中TSN的含量在给药后10min左右达到高峰，然后迅速下降，表明TSN在大鼠体内能被迅速吸收和消除。肝脏赖氨酸加合物在给药后2小时达到峰值(图2B)。TSN诱导的大鼠肝毒性其蛋白加合物峰值时间在8 h前有一段滞后时间，8 h后大鼠血清ALT活性继续升高，直至24 h达到平稳期，这说明TSN RM蛋白加合物的形成到大鼠肝损伤的发生需要一定的时间，肝损伤要到24h才能修复。此外，与TSN本身相比，肝毒性与TSN RM蛋白加合物的关系更紧密。

我们还同时测定了血清中的蛋白质加合物。结果表明，血液中TSN RM-赖氨酸加合物水平与肝脏中的RM-赖氨酸加合物水平有很好的相关性(图2B)，这表明血液是一种无创性样本且易于获取，应更适合于肝损伤的评估。

图2 肝脏中的蛋白加合物与TSN所致肝损伤之间的相关性

(A)我们用不同剂量的TSN(n≥3)处理大鼠肝脏后检测TSN RM-赖氨酸加合物以及大鼠肝脏中赖氨酸蛋白加合物的含量变化情况，且含量最丰富的加合物归一化为100%。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001（与对照组对比）。(B)血液和肝脏中赖氨酸蛋白加合物的时程变化分别用绿色和黄色表示，血清ALT活性的时程变化和TSN含量的时程变化分别用紫色和红色表示。TSN以7.5 mg/kg剂量灌胃，我们在给药后不同时间点(n≥3)检测TSN RM-赖氨酸加合物、血清ALT活性和TSN，且含量最丰富的加合物、ALT水平和TSN均归一化为100%。

3.TSN RM修饰的大鼠肝脏蛋白鉴定

分析结果表明，TSN RM对蛋白质的修饰可能是肝损伤的一个潜在原因，但目前还不清楚哪些蛋白质在TILI中扮演着重要角色，以及它们是如何发挥作用的。因此，我们使用2DSCX-Nano-LC-Q-TOF-MS对TSN RM修饰的肝脏蛋白质进行了测定。

我们将 7.5 mg kg^-1的TSN给药至大鼠腹膜内后，在大鼠肝脏中检测到TSN及其代谢物、m/z为 489.2104 的二酯解产物和m/z为 531.2236 的脱乙酰产物。这些代谢物可能会修饰细胞蛋白中的赖氨酸残基，因此我们将C₂₆H₃₂O₉和C₂₈H₃₄O₁₀的分子组成作为可变修饰物添加到Mascot的赖氨酸残基中。此外，之前的研究中我们确定的9种 TSN RM修改模式也被添加。结果我们发现至少 84 种蛋白质被TSN RM共价修饰。

m/z 847.9040处的准分子离子[M+2H]²⁺与氨基-磷酸合成酶(氨基)和线粒体(CPSM)的加合多肽⁹⁰⁶QAKEIGFSDK⁹¹⁵相匹配，与未修饰的多肽相比质量增加572 Da，这表明T1-K发生了修饰。与未老化肽相比，y8-y9、b4和b8-b9的碎裂离子也增加了572 Da，因此赖氨酸应该在第908位被T1-K修饰，而其他碎裂离子b1和y2-y6则表明该肽属于⁹⁰⁶QAKEIGFSDK⁹¹⁵(图3A)。蛋白6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6PGD)的特异性多肽⁵⁷SLKDMVSK⁶⁴在m/z 740.3519处有一个准分子离子[M+2H]²⁺，比相应的未修饰多肽多572 Da，因此它应由T1-K修饰。我们可从老化肽的 y1和 y3-y6的碎片离子中质量同时增加572 Da可推断结合位点为K64，而其他碎片离子b2-b4和b6-b7表明该肽属于⁵⁷SLKDMVSK⁶⁴。我们还发现T1与PP1-γ催化亚基（PP1G）的赖氨酸和其他蛋白质共价连接。分子离子[M+3H]³⁺在m/z 619.2842处匹配的加合肽³⁵⁸ MNEKMASSFLK^368为是羧酸酯酶1C（EST1C），与未修饰肽相比T2-K的质量增加了570Da，说明它被T2-K修饰。与未加成肽相比，分子离子[M+3H]³⁺中的b7-b9、y8和y10的裂解离子也增加了570 Da，因此赖氨酸应该被TSN脱氢代谢产物修饰，即K361发生了T2修饰(图3B)。谷氨酸脱氢酶1、线粒体(DHE3) 和其他蛋白质也存在这种修饰模式。果糖-二磷酸醛缩酶B的特异性多肽⁸⁸DSQGKLFR⁹⁵在m/z 740.8856处有一个分子离子[M+2H]²⁺，比未修饰的多肽多530 Da，因此它可能被T3-K修饰。老化的多肽b5-b7和y6裂解离子的质量增加了530 Da，我们推测结合位点为K92。同样，TSN的其他酯解产物也能修饰蛋白质的赖氨酸残基。例如，m/z为760.3828的准分子离子[M+2H]²⁺与谷胱甘肽合成酶的加合多肽⁴³⁵QGTTLVMNK⁴⁴³相匹配，与未修饰多肽相比质量增加了528 Da，表明T5-K发生了修饰。y1、y4-y5和y7的碎片离子质量也比未加合肽相比增加了528 Da，因此赖氨酸应该用TSN酯解代谢物进行修饰，即对K443进行T5-K修饰。

我们在大鼠肝脏蛋白中也检测到半胱氨酸残基的修饰。例如，⁴⁴TRTLDCDPK⁵²的半胱氨酸与谷氨酰胺合成酶(GLNA)的结合位点被认为是与m/z 780.8782的准分子离子[M+2H]²⁺质量增加512 Da以及y5-y6、y8、b6和b8的碎裂离子与未老化多肽(图3)的结合位点，因此应在C49上用T10-C对其进行修饰。研究发现，T5-C对丙酮酸羧化酶线粒体(PYC)中的半胱氨酸残基进行了修饰。在m/z 783.3588处有一个准分子离子[M+2H]²⁺，比相应的未修饰多肽质量多588 Da。而其他碎裂离子y2-y8、b1-b4进一步证实了修饰模式和结合位点(图3C)。对半胱氨酸残基的其他修饰也存在于其他蛋白质中，如METK2和PEX19。

图3 TSN RM加合肽的MS/MS谱图

(A)蛋白质氨甲酰-磷酸合成酶[氨]，线粒体(CPSM；(B)羧酸酯酶1C(EST1C)；(C)丙酮酸羧化酶，线粒体(PYC)。

4.TSN RM修饰大鼠肝脏蛋白的生物信息学分析

为了更好地理解加合物蛋白的生物学作用，我们应用UniProt、NCBI、Cytoscape 软件、DAVID生物信息学资源 6.8 程序和比较毒物基因组学数据库 (CTD) 进行通路和生物信息学分析。

CTD 中的 MyGeneVenn 显示 18 种修饰蛋白与肝病相关，其中ALBU、ALDOB、CATA、CPSM、ECHA、PYC、A1M、SODE、ST1C1和VIME等10种蛋白质已被报道与化学和药物性肝损伤直接相关，五种蛋白质（SAMP、CEBPA、G3P、GLNA、6PGD）与肝癌直接相关。此外有3种蛋白质与 DILI 和肝癌相关，它们是 ACTB、ENOA和 BIP。

根据KEGG通路分析，修饰蛋白主要参与代谢通路，因此蛋白质的 TSN RM修饰可能主要影响代谢过程。为了深入了解所有涉及的途径，我们使用 Cytoscape 平台的 ClueGO 插件进行了富集分析。TSN RM修饰基因的功能注释如图4所示，基因网络分析集中在22个基因和10个代谢通路上，包括糖酵解/糖异生、半胱氨酸和蛋氨酸代谢、脂肪酸降解、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、柠檬酸循环（TCA循环）、丙酮酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢、精氨酸生物合成、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢以及氮代谢。通路的富集分析表明，在功能分组网络中突出显示的一些关键基因是连接代谢途径的重要基因，它们位于网络的节点，如Dld、Mdh2、Sdhb、Pc、Glul、Cps1、Glud1等。Dld是连接五种代谢相关途径的关键基因，包括糖酵解/糖异生、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解、柠檬酸循环（TCA循环）、丙酮酸代谢、乙醛酸和二羧酸代谢。同样地，Glud1、Cps1和Glul是连接三个代谢相关途径的关键基因，包括丙氨酸/天冬氨酸/谷氨酸代谢、精氨酸生物合成和氮代谢。此外，CTD分析表明，所有10条通路都是与肝病相关的关键通路。

图4 具有源自Cytoscape数据库的通路和基因的功能分组网络

TSN靶基因在网络中用红色字母表示。球体代表不同的代谢途径。实线表示蛋白质和通路之间的直接物理关系。不同的节点颜色代表不同的功能组。术语根据其kappa分数级别(≥0.4)进行链接。

所有已鉴定的加合蛋白质GO功能分类是根据它们的细胞成分、生物过程和分子功能而来的。在84个TSN RM修饰的蛋白质中，82个蛋白质被注释为其分子功能(图5A)，83个蛋白质被注释为其生物学过程(图5B)，84个蛋白质被注释为其细胞成分(图5C)。GO分析表明，具有结合活性的蛋白质、ATP代谢过程相关蛋白和细胞质相关蛋白分别代表了分子功能、生物过程和细胞成分的最大群体（图5）。生物学过程的其他重要类别是ADP代谢过程，NADP代谢过程和糖酵解过程。生物过程中修饰蛋白的GO注释表明 TSN RM修饰在代谢相关过程中显着富集，如KEGG分析所示。

图5 TSN RM修饰蛋白的基因本体功能分类
根据分子功能(A)、生物学过程(B)、细胞成分(C)对已鉴定的修饰蛋白进行基因本体功能分类。

讨论

目前一些研究结果表明，药物RMs与蛋白质共价结合通常会导致急性肝毒性。然而肝损伤的评估是一个严峻的挑战，因为修饰蛋白与DILI之间的关系通常很难直接揭示。尽管已发现TSN RM-蛋白质加合物的形成与肝毒性有关，我们对 TILI 的机制理解仍然难以琢磨，部分原因是难以量化和绘制修饰的蛋白质。通常，酶联免疫吸附试验 (ELISA) 是临床试验中广泛使用的蛋白质定量技术，但其单靶点设计，通量低，并且检测复合蛋白质时价格极其昂贵。此外，部分蛋白的检测不能准确反映所有修饰蛋白的数量。在这项研究中，我们开发了一种灵敏而特异性的分析方法来定量体内TSN衍生的蛋白质加合物：这种定量方法首先使用两种酶（胰凝乳蛋白酶和链霉蛋白酶E）从蛋白质中释放游离氨基酸，包括 TSN RM 加成的赖氨酸，然后通过 UHPLC-MS/MS 方法对后者进行灵敏的特异性定量。我们开发的分析方法专注于药物，避免了对不完整的靶蛋白生物标志物的定量。基于TSN RM修饰赖氨酸的定量方法不仅能直观地反映修饰蛋白质的数量，而且与常用的蛋白质定量方法相比，所需的数据采集和处理时间更短。

结果表明，TSN RM蛋白加合物与肝毒性程度呈剂量依赖关系，暗示蛋白质修饰在肝损伤中的重要性。这是首次发现TSN RM蛋白加合物与肝毒性的关系，该方法可能成为评价DILI（特别是复杂化合物）的一种有效手段。此外，作为肝损伤生物标志物的蛋白质加合物在识别药物性肝损伤病因方面具有独特的优势，这对于临床医生来说通常是一项艰巨的任务。然而，大多数药物蛋白加合物在组织中含量丰富而不是血液中，这限制了它们作为DILI诊断生物标志物的应用。在本研究中，我们在血清中检测到TSN RMs修饰的低丰度蛋白。血清赖氨酸加合物含量与肝脏赖氨酸加合物含量高度一致，暗示血清赖氨酸加合物可作为评价DILI的微创生物标志物。

定量分析结果表明，TSN RMs 对蛋白质的修饰应该是 TILI 的可能原因，但尚不清楚哪种蛋白质在肝毒性中起重要作用。在之前的研究中我们提出并在体外验证了药物 RMs 诱导的肝毒性预测策略，然而，由于 TSN 在 HLM 中的代谢不能完全反映体内情况，肝蛋白的共价修饰需要进一步研究以揭示分子机制。在这项研究中，该策略成功应用于大鼠，并在肝脏中鉴定了大规模TSN RM修饰的蛋白质，随后我们进行了生物信息学研究从而分析 TILI 的分子机制。

能量代谢是肝脏中一个非常重要的生物过程，参与代谢过程的众多蛋白质受到多种修饰的调控，如 S-硫醇化、戊二酰化和乙酰化。根据 KEGG 通路分析，TSN RM修饰的蛋白质主要参与了代谢通路过程。我们将修饰的蛋白质映射到糖酵解、TCA 循环、脂肪酸降解和氨基酸代谢途径的组成部分（图6），结果表明糖酵解中包含的多个靶点被TSN RMs修饰，如ALDOB 、TPIS、G3P、PGAM1、 ENOA、DLDH、AK1A1 和PYC（图6绿色部分）。之前的生物学功能评估表明，这些修饰在体外和体内都抑制了TPIS的活性并诱导了ENOA的活性，其次是线粒体功能障碍和能量代谢紊乱，这表明关键的修饰能量代谢酶（TPIS和ENOA)主要负责TILI。此外，我们在TSN处理的大鼠中检测到丙酮酸浓度显着增加，这是糖酵解的最终产物，因此，丙酮酸的积累应该是由上述共价修饰的蛋白质在糖酵解中引起的。我们还发现两种必需的TCA循环酶MDHM和SDHB被TSN RM共价修饰，这可以解释TSN导致TCA 循环中间体（如 α-KG、富马酸盐和柠檬酸盐）水平的大幅下降。此外，TSN处理后各种氨基酸和脂肪酸水平降低，负责其活化和降解的蛋白质被TSN RMs修饰，如THIKA、ACADL、ECHA、GLNA、CPSM、DHE3，CATA和MCCB，这表明这些蛋白质的活性通过共价修饰受到影响并进一步导致氨基酸和脂肪酸水平显着降低。氨基酸代谢需要线粒体参与，氨基酸水平的显着降低表明肝线粒体功能障碍是TSN诱导肝毒性的关键原因。此外，损害肝线粒体脂肪酸氧化的毒素与肝脂肪变性密切相关，TSN治疗引起脂肪酸紊乱，这表明TSN可能进一步诱发肝脂肪变性。此外PPI分析表明，这些TSN RM修饰蛋白是连接富集代谢途径并位于网络节点的重要蛋白，CTD分析表明所有代谢途径都是与肝病相关的关键途径。因此，参与能量代谢的TSN RM修饰蛋白应在TILI中发挥关键作用，它们调节肝细胞的能量代谢。这些蛋白的修饰扰乱了体内平衡，这是通过靶向这些蛋白产生肝毒性的潜在机制。

在以往的研究中，TSN被证明在体外对各种人类癌细胞株具有抗癌作用。此外，我们用接种肝癌H22细胞的小鼠研究了TSN的体内抗癌作用，结果表明TSN通过诱导肝癌细胞线粒体依赖性凋亡而具有较强的抗癌作用。以往的研究表明，TSN可通过与糖酵解酶、TPIS和ENOA的共价结合，促进原代大鼠肝细胞线粒体功能障碍进而诱导线粒体介导的细胞凋亡和肝细胞能量代谢紊乱。我们的研究结果表明，TSN-RMS还修饰了其他参与代谢途径的蛋白，包括糖酵解、TCA循环、脂肪酸氧化和氨基酸代谢相关的酶，这表明TSN通过与代谢途径相关蛋白的共价结合而诱导多种癌细胞凋亡，进而导致线粒体功能障碍。

此外，TSN可以通过上调CCAAT/增强子结合同源蛋白(C/EBP Zeta)的表达显著增强人类原代NSCLC细胞对TRAIL介导的凋亡的敏感性。我们的结果表明，C/EBP家族的另一成员C/EBPα可以被TSN-RM共价修饰。C/EBPα在肺癌和肝癌细胞中作为肿瘤抑制因子。因此，TSN RM可能通过共价结合激活C/EBPα，从而在肝癌细胞中发挥抗肿瘤作用。这一假设需要生物实验来验证。此外，比较毒理基因组学数据库中的MyGeneVenn显示有8个修饰蛋白与肝癌相关，暗示TSN的抗肿瘤活性可能来自于多种蛋白的相互作用。

综上所述，上述结果表明代谢过程通过生物信息学途径和靶蛋白相互作用在TSN的肝毒性中起重要作用。除了已发现的蛋白(ENOA和TPIS)外，TSN RMs还可以修饰糖酵解、TCA循环、脂肪酸降解和氨基酸代谢中的多个靶蛋白，并且多个靶蛋白之间的相互作用进一步促进了肝线粒体能量代谢紊乱。值得注意的是，先前的研究表明TSN通过诱导肝癌细胞线粒体依赖性凋亡而具有很强的抗癌作用，因此推测该活性可能与TSN RMs对蛋白质共价修饰引起的肝线粒体能量代谢紊乱有关。这种双重效应我们应该在药物开发中综合考虑。我们的化学蛋白组学方法可以同时鉴定大规模的药物修饰蛋白，这可能进一步促进早期诊断生物标志物的发现和个性化药物的更安全实施。这一新发展的方法一直是寻找候选生物标记物的重要考虑因素，特别是对于地塞米松的治疗。

图6 TSN RM 修饰蛋白的通路图谱

TSN RM 修饰的蛋白质富含柠檬酸循环、糖酵解和氨基酸代谢途径。 TSN RM 修饰的蛋白质以绿色突出显示。

结论

在本研究中，我们开发并验证了一个高度快速、特异、灵敏且可重复的平台用于评估TSN体内诱导的肝毒性。结果表明，TSN RM修饰赖氨酸的定量可反映其对大鼠的肝毒性，且血蛋白加合物可作为TILI的特异性生物标志物。蛋白质加合物的定性和生物信息学分析进一步表明，TILI可能是由TSN RM修饰的蛋白质之间的多靶点相互作用引起的，特别是在能量代谢方面。该方法在化学品毒性评价中具有潜在的应用价值。

原文链接：  

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34000341/

----------微科盟更多推荐---------- 

免费生信作图平台——生科云
	长按左侧二维码  进入生科云
生科云所有分析工具可以免费使用，不收取任何直接或间接费用；您还可以在微信上联系微生态老师，随时获取免费的指导，帮助您解决分析时遇到的问题；专业的生信分析团队，持续添加、更新、优化生信云上的分析工具，集成多种生信分析流程，一键批量生成主流科研图，帮您节省时间，有更多的时间探究生物学意义。

----------微科盟精彩文章---------- 

如果需要原文pdf，请扫描以下二维码，加助理获取

微科享期待与您交流更多蛋白组学问题

（联系蛋白组学老师即可申请入群）

请关注下列二维码

了解更多蛋白组学知识