什么？单凭外周血就能洞察淋巴瘤进展？周剑峰教授又来给你长知识了！｜第七届苏州淋巴瘤高峰论坛

仅供医学专业人士阅读参考

与周剑峰教授一起，畅谈NGS！

“目前液体活检已经发展到了可以和组织活检相媲美的程度”，周剑峰教授说道，“在未来，我们需要更多前瞻性研究来加以证实，以期更好地落实在临床实践中。”

目前肿瘤分子检测的金标准是基于淋巴结和组织活检，但它有几个缺点：

①存在与组织采样相关风险；

②基于DLBCL肿瘤空间异质性造成的偏倚风险；

③采样时间上的局限性；

④在一些如患有原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）或骨淋巴瘤等的患者中，难以取得活检。

但液体活检克服了这些问题，同时还可以监测血液肿瘤微小残留病（MRD），追踪克隆演变。

3月27日，在第七届苏州淋巴瘤高峰论坛主会场，华中科技大学同济医学院附属同济医院周剑峰教授就外周血中的循环肿瘤DNA（ctDNA）在淋巴瘤中的应用做了相关汇报，对液体活检技术做了一个全面深入的大起底。医学界血液频道整理了精彩内容，以飨读者。

液态活检材料一般为循环肿瘤细胞（CTC）、ctDNA、细胞外囊泡、循环游离RNA、miRNA、外泌体。其中，ctDNA（坏死或凋亡的细胞释放入外周血）是液体活检技术中最成熟也是最重要的一部分，其检测平台主要包括二代测序（NGS）和微滴式数字PCR（ddPCR），与real time PCR不同，ddPCR无需建立标准曲线。

液体活检PK组织活检

▌Round 1

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在一切言语面前，数据才是事实。

2017年，一项发布在Blood杂志上关于NGS-液体活检分析鉴定弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）基因突变发生率及分子图谱的研究显示，液体活检不仅能达到和组织切片活检一样准确的基因分型结果，还能检测出其无法检测出的数据。

2020，Blood杂志上一项关于NGS-液体活检分析鉴定复发/难治性DLBCL（R/R DLBCL）基因突变分子图谱的研究显示，与初治患者相比，R/R DLBCL患者的ctDNA中，KMT2D、TP53、CREBBP、NFKBIE、FOXO1、MS4A1突变富集。研究人员进一步对早期复发DLBCL患者的ctDNA和晚期复发DLBCL患者ctDNA基因突变分子突变分析提示，MS4A1（CD20）突变可能与R-CHOP治疗耐药有关（图1）。

图1 KMT2D、TP53、CREBBP、NFKBIE、FOXO1、MS4A1突变富集；MS4A1（CD20）突变可能与R-CHOP耐药有关

First Blood！

NGS基因分型准确，能有效检测基因突变！

▌Round 2

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液体活检的结果似乎令人很满意，但是，血液游离DNA片段（cfDNA）和肿瘤组织gDNA究竟有多高的一致性呢？

基于Blood发表的两篇研究结果显示，血液cfDNA和肿瘤组织gDNA在DLBCL中相符率为82.7%，而在肿瘤负荷较低的霍奇金淋巴瘤（HL）中，二者相符率也达到了87.5%。不仅如此，2016年，Science杂志上发表的一项研究显示，对于滤泡细胞淋巴瘤（FL）转化性淋巴瘤中，液体活检比组织活检检出率更高（图2）。

图2组织活检（左边）VS液体活检（右边）

Double Kill！

cfDNA与gDNA一致性更高！

▌Round 3

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弥漫大B细胞（DLBC）是多基因作用所致，依据基因表达模式的不同，将弥漫大B细胞分为GCB（生发中心B细胞）、non-GCB（非生发中心来源）,也称COO分型，常规病理标准为Hans分型。2016年，Science杂志上发表的一项研究，利用NGS对DLBCL进行了COO分型，结果显示，NGS分型比常规病理方法（Hans algorithm）的分型更精确（图3）。

图3 NGS和Hans分型结果

Trible Kill！

NGS分型精准！

▌Round 4

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研究发现，在疾病进展（PD）阶段，ctDNA等位基因频率（AF）较高，完全缓解（CR）时，AF处于最低范围，复发前，AF出现上升拐点（图4），这提示着血液中ctDNA负荷的动态变化与DLBCL治疗效果和疾病进展相对应，同时，这也意味着ctDNA检测还可改善对疾病复发状态的监测并有利于完善分子学缓解的定义。

2018年，一项发表于Journal of Clinical Oncology杂志的研究表示，依据ctDNA定义的分子学缓解较PET/CT（正电子发射计算机断层显像）能更好地预测治疗疗效。为此，研究人员分别将一次化疗和二次化疗ctDNA的减少值作为两个指标：早期分子反应（EMR）、主要分子反应（MMR），并依此进行分层，结果显示ctDNA浓度在无事件生存患者中分层良好（EMR P=0.014，plasma P＜0.001；major molecular response:serum P＜0.001，plasma P＜0.001），其浓度变化与预后不同阶段相关(图5)。

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图4 CAPP-Seq和lgHTS随疾病进程的变化；图5 EMR和MMR的NGS分层结果

Quadra Kill！

NGS能良好监测预后！

▌Round 5

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ctDNA能无创实时检测淋巴瘤的克隆演变，揭示复发时新的突变位点，对用药选择具有指导意义，如通过检测CARD11突变，预测伊布替尼反应性。

2016年，Science杂志刊出的一项研究，提示NGS动态检测IgH重链重排，可预测复发几率，依据研究结果，NGS阳性结果可提前半年暗示复发（图6）。

图6 NGS基因突变检测结果和复发

Penta Kill！

NGS有利于指导用药，并能监测复发情况

▌Round 6

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• 对于外周T细胞淋巴瘤，ctDNA表达谱可以通过不同信号通路的激活来选择对应药物：

• 对于T细胞淋巴母细胞性淋巴瘤（T-LBL），ctDNA能较早反映疾病的进程变化；

• 对于肿瘤负荷很小的血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤，可通过ctDNA检测到几乎一致的突变特征，并提示预后，如变异等位基因频率不再上升提示预后良好；

• 对于原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL），患者脑脊液ctDNA丰度高于血浆，且PCNSL基因组改变已知，脑脊液ctDNA灵敏度强于流式，如果预算有限，可只检测最常见的五个突变基因便能涵盖大部分的患者。
  

ACE！

NGS对多种淋巴瘤精准诊疗皆有裨益！

国内NGS

目前周剑峰教授所在华中科技大学同济医学院附属同济医院已经建立了较为成熟的NGS检测流程，覆盖171血液肿瘤Top基因的突变丛基因，主要位于CDS（蛋白质编码区），包括部分编码区，Panel的首诊检出率可达90%以上，UMI标签深度大于50000X，正拟纳入IGH、MTC等因新裂点丛集区，已完成测序疾病谱：DLBCL、FL、NKTCL、cHL、血管内大B、PTCL、BL、HLH、Health。在临床实践中，液体活检呈现出与固体活检结果的一致性，在MRD检测，提示预后、监测克隆演变、CAR-T靶点突变筛查均展示出优于固体活检的良好效果，而对于能否通过液体活检预测疗效，临床试验正在进行之中。

对NGS的未来发展，周剑峰教授也给出了其期望：“液体活检与多组学数据结合，建立机器学习工作流程，实现肿瘤组织的快速、高效筛查”。最后，周剑峰教授对液体活检的优越性做出了全面总结：

• 液体活检可用于实体瘤，也可用于血液肿瘤
• 外周血ctDNA检测方法方便、快速、无创、多次取样
• 全方位动态检测疾病进展，指导个体化治疗
• NGS深度测度和ddPCR可有效的对ctDNA突变进行检测
• 液态活检和组织检测相比，更反映肿瘤的基因全貌
• 对比组织活检，液态活检可以促进疾病管理
• 血浆ctDNA可对DLBCL等疾病进行准确的的分子分层，预后分析，鉴定靶药靶点，检测疾病的进展与复发

专家简介

周剑峰教授

• 二级教授，主任医师，博士生导师
• 国家杰出青年基金获得者，华中科技大学学者特聘教授
• 现任华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科（国家级重点学科，国家临床重点专科）主任、同济内科学系副主任、同济医院临床研究中心主任、教育部重点实验室“同济医院肿瘤生物医学中心”副主任
• 湖北省血液免疫细胞治疗临床研究中心主任
  
• 中华医学会血液分会常委
• 中国抗癌协会血液肿瘤专业委员会候任主任委员、青年委员会主任委员
• 中国抗白血病联盟副主席
• 中国抗淋巴瘤联盟常委。
• 任中华血液学杂志，中国实验血液学杂志等多种学术杂志编委。
• 专业主攻方向为血液系统恶性肿瘤的分子诊断和靶向治疗。在国际期刊上共发表专业论文100余篇，总影响因子＞260分，近5年论文的SCI总引用1600余次。

参考文献：

[1]J Clin Oncol 2018 oct 1；36（28）；2845-2853

[2]blood adv,2020 jul 14;4(13):2886-2898

[3]blood 2017；129（14）：1947-1957

[4]Haematologica，2020 Feb 20；haematol.2019.241208

本文首发：医学界血液频道

本文作者：姝姝

本文审核：周剑峰教授

责任编辑：Amelia

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