RNA提取实验常规样本采集（二） | RNA专题
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往期RNA专题精彩汇总：
1. RNA提取的那些事
2. 困难组织的RNA提取总结
3. RNA不稳定原因分析
4. 改善RNA提取质量的方法
5. RNA纯度和完整性鉴定
6. 不同物种RNA质检图介绍
8. 不同物种RNA质检图介绍
10. RNA提取实验常规样本采集（一）
今天我们来说一说RNA实验常规样本——PAXgene Blood RNA Tube 采血和血清血浆的采集。
PAXgene Blood RNA Tube 采血
PAXgene Blood RNA Tube 采血
血液由血细胞和血浆组成，其中血细胞包括红细胞，血小板，白细胞；白细胞又包括粒细胞（酸性，中性，碱性粒细胞）和单个核细胞（淋巴细胞，单核细胞）。
全血：是将人体内血液采集到采血管或采血袋内所形成的混合物 。
血液离体后血细胞内的RNA不稳定，采血后极易降解，而体外的基因诱导作用会使得转录组数目增加，体外RNA降解和基因诱导均可导致高估或低估体内转录组数目。
LC-Lab使用BD公司的PAXgeneTM Blood RNA Tube（以下称为PB采血管）采集全血，采集2.5ml血液/管。（PB采血管：内含稳定体内基因转录性状的添加剂，通过减少体外RNA降解，并将基因诱导减少到最小而发挥作用）
产品 | 货号 | 特征 | 采血量 |
PAXgeneTMBlood RNA Tube | 762165 | 含有6.9ml添加剂 | 2.5ml |
采集全血过程：
1、采血前，应将采血管恢复室温（一般PB采血管保存于室温或4℃，最高不超过40℃）。
2、采血时，多种采血管采集时，最后使用PB采血管；仅用PB采血管时，先用另一个采血管采集1~2mL血样，丢弃该采血管，再使用PB采血管（作用：采血器容积能被预灌注，另减少血压造成的冲击力，一定程度上清洗采血管） 。
3、采血后，立即上下颠倒混匀十次左右，18~25℃正立放置2h。
4、若不立即提取，将采血管正立置于塑料试管架上（注意：试管架与采血管之间需留有空隙，防止低温保存过程中管壁开裂），先于-20℃放置24h，然后转移至-80℃进行长期保存或转移至干冰中进行运输。
5、运输时请使用厚壁泡沫盒，放入充足的干冰，在样品保存及运输过程中应避免反复冻融。
全血的保存方式：
① BD-PAXgeneTM Blood RNA Tube（含有抗凝剂，RNA稳定剂，作用：减少体外降解，将体外基因诱导作用降到最低），通常为静脉采血，采血量：2.5ml，适用对象：人和灵长类动物。
② 普通医用抗凝管（只含有抗凝剂），抗凝剂通常为：EDTA、柠檬酸钠，不允许使用肝素作为抗凝剂，因为肝素是PCR酶的活性抑制剂，会抑制下游实验的PCR反应。
③ 冰冻血液溶解过程中会有破碎的细胞释放RNase，因此勿直接冻存新鲜血液，可在新鲜抗凝血中直接加入trizol裂解混匀，-80℃保存，避免反复冻融（trizol：血液=3:1），采样后一周内必须提取RNA。
注意：实验中发现，PB采血管保存的全血所抽提出来的RNA得率往往会低于普通抗凝管保存的全血所抽提出来的RNA，这是因为PB采血管在未采血前已经有6.9ml的添加剂在里面了，故而采血量最多只能容纳2.5ml，而普通的抗凝管里面只含有抗凝剂，且抗凝剂的量较少，所以同等体积的抗凝管，普通抗凝管的采血量会更高，因此普通抗凝管收集的全血中RNA丰度会更高。
血清血浆采集
血清血浆采集：
血浆：是抗凝血液经离心分离得到的淡黄色透明液体。
血清：血液凝固析出的淡黄色透明液体。
血清与血浆的区别：血清中不含纤维蛋白等凝血因子。
注意：
①分离血清血浆应严格按照操作说明进行，操作需在1h内完成，避免出现溶血现象，血清血浆分离后避免反复冻融。
②血清血浆送样量的原则：越多越好，如果手头上的血清血浆量较少，则有多少就送多少，通常该种类型的样本RNA含量较低，所以需要通过加大样本量以富集足够多的RNA，以保证后续实验的顺利进行，此外血清血浆RNA通常不质检。
③分离血清/血浆样本的全血不可冷冻，混入的血细胞尽量弃尽。
溶血现象：即因红细胞细胞膜的破裂而导致的红细胞破碎、血红蛋白溢出的现象。溶血可由多种物理或化学因素引起，尤其在人体外，渗透压的变化、机械外力，温度的变化，酸碱度的变化或血液处理的过程中人为添加的一些化学物质，均有可能引起不同程度的溶血。
应对策略：
（1）血液离开人体后，血液环境的稳定性与保存时间的长短呈反比，细胞膜的稳定性也在下降，在这种情况下，应尽快开展血清血浆的分离 。
（2）不同的抗凝剂有其不同的分子构型，会对血液中各细胞的细胞膜产生不同的作用，有的会增加细胞膜的稳定性，有的会降低细胞膜的稳定性，所以选择一款合适的抗凝剂至关重要（抗凝剂推荐：EDTA、柠檬酸钠）。
（3）血液存放过程中温度过高或反复冻融对细胞膜有很大的损害。温度过高及反复冻融会使细胞膜上的结构蛋白构象发生改变，进而造成细胞膜的弹性降低以致破解产生溶血现象，所以用于分离血清血浆的血液应避免反复冻融。
好了，本期RNA提取专题小课堂就到这里了。
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