实验访谈之——RNA提取那些事儿
引言
龙少侠
亲爱的小越姐，样本到达你们这里后，你们是如何选择提取RNA的试剂盒的？
小越姐
对于每一份样本，我们都希望能提取出好的结果，所以每次提取时，我们首先都会查看以往的提取记录，看看是否有相同的物种提取成功的案例，如果有，我们会优先选择同款的提取试剂盒；如果没有的话，我们会分析样本的类型、属性等去选择合适的提取方法，一般会先进行少量样本的提取测试，如果效果欠佳也会查找文献看看如何优化提取，在确定选择的方法合适后，才会正式进行提取的安排；如果样本需要进行提取方法的摸索时，会需要花费更多的时间，所以有时候提取结果的反馈就会比常规时间更久一些了，但是一般客户都是理解以及愿意等待的o(*￣)￣*)o。
龙少侠
小越姐，那你们一般提取RNA的周期要多久呢?
小越姐
一般提取出来的RNA质量好时，我们会在4~5天左右就可以给客户发送RNA提取结果的质检报告了；但是其实就像上个问题那样，对于一些比较特殊的样本类型，比如RNA丰度较低样本（像是温郁金、松叶针尖等）或是多糖多酚含量较高的样本（像一些果实或铁皮石斛等），我们就会根据样本的属性进行多种方法的测试，一般一种方法不合适马上切换另外的方法再去尝试，虽然可能对我们来说会累一点，也需要花费更多的时间，但是想想每一份样本客户准备都很不易，所以我们也希望通过各种方法的测试，努力能得到一个好的结果，只是这个时候就需要更多一些的时间去处理，那么报告也会延迟发放，不过咱们的客户一般也都会理解并给予我们时间的~
龙少侠
小越姐，那你们使用什么方式检测RNA的质量呢？
小越姐
RNA的质量我们一般会从总量和完整性两个方面进行检测，我们会采用紫外分光光度计对RNA的浓度、总量及OD值进行检测，然后采用Agilent 2100/4200进行RNA完整性的质量判断~ like this
龙少侠
小越姐，你们是如何评估提取的RNA能否能应用于后续的实验呢？
小越姐
总体来讲我们是根据RNA总量和完整性结合后续的服务类型来共同评估所提取的RNA能否应用于后续实验的，一般总量足够，完整性越好或2100/4200模拟峰形图更锐利的RNA越符合后续实验要求，但是也要结合不同的后续实验方法共同来判断。比如做lncRNA服务的样本，因为是去除rRNA的方式建库，所以完整性相对低一点的样本依然可以实验，但是做lncRNA服务的样本是不能有原核生物RNA污染的，因为一旦有原核污染，就会极大影响后续的实验结果，这个时候我们就会重点关注RNA质检结果中是否有原核RNA的污染了。（例如图1-2中的这株植物18s和28s中出现的一个小峰）
龙少侠
实验样本这么多，你们如何保证样本不会混淆呢？
小越姐
从样本进入实验室被录入系统后，它就会一直有一个属于自己的唯一编号，在提取前，反复核对样本编号，实验中的每一次转管前，均需要认真核对确认样本名称，实验中的每次转管，我们会采用错位放置防止出错，同时也会进行拍照留存，采用我们联川拍照黑科技（以后揭秘o(*￣)￣*）o），将每一次转管的照片，传递至云平台，用于实验后再次复查，经过这样实验前，实验中以及实验后的各种检查校正，确保不会出现混淆和错误；
龙少侠
小越姐，最后一个问题，你觉得要把RNA提取服务做得更快更好，你有什么建议么？
小越姐
建议倒说不上，只能说从实验角度来讲，要做到更快更好，我觉得样本前期准备规范真的是非常非常的重要：比如样本名称要简单清楚易识别，建议最好是字母加数字的组合越简单越好，特别要记得不要使用中文命名，往往中文命名的样本，识别起来都非常困难o(╥﹏╥)o；然后实际的样本名称要和提交单的名称保持一致，就是样本管子上标记的是什么名字，提交单就要是什么名字；再有就是提交单的信息一定要是完整正确的，因为我们需要根据提交单的信息决定样本的提取方法以及安排，所以一旦这些信息准确，样本编号容易识别，会极大提升我们的工作效率哦O(∩_∩)O~
结语
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