m6A测序文章中需要哪些高频图表?(带视频教程)| m6A专题
做完了m6A测序,很多老师会问,我究竟该在文章里放哪些图好呢?
今天就带大家回顾下,一些在m6A文章里经常高频出现的图表。这类图一般包括2组或多组测序数据取交集后,缩小筛选数据的范围。例如RIP-seq与m6A-seq取交集后意味着那些基因既带有m6A修饰又能被RNA结合蛋白结合。或者四种不同shRNA敲除方法,找到被共同影响的基因。亦或是不同的细胞系中找到共有基因。如果有条件最好把取交集后重要的基因标识出来。
那么如何自己可以绘制相应的Venn图呢?方法还是挺多的,既可以登录我们联川生物的云平台上面的韦恩图模块(https://www.omicstudio.cn/)
另一种方法就是登录http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/ 作图,也是简单便捷。
四象限图或多象限图的目的是找到具有独特表达模式的一类基因。如m6A水平上调但是mRNA水平下调的基因,就属于同一类。根据已有的经验可以判断可能由YTHDF2介导了mRNA的降解。与前面韦恩图相似点在于进一步帮助缩小数据筛选的范围。
那么如何自己可以绘制相应的四象限图呢?各位老师也可可以登录我们联川生物的云平台上面的四象限图模块(https://www.omicstudio.cn/)即可轻松绘制。
Peak整体展示图的目的是为了说明,本次IP实验比较成功,IP文库中大量Peak分布在5端UTR和3端UTR区域附近。而Input则是没有特别偏好性。目前联川默认可以协助各位老师做第一种类型的图。这类图通常也可以跟motif的结果放到一起,节约版面。
饱和曲线有两种作图方式,我们可以看到一种是以peak calling那种类似的方式展开,另一种是累计曲线的方式。两种图其实说明的都是同一个意思,表示该样本整体m6A水平大于或小于另一个样本,与前面第1部分整体m6A水平的三种检测方式异曲同工。
如果整体m6A水平偏低,达到饱和程度会变快,而m6A水平偏高的样本饱和程度会偏慢。如果在联川已经有开展m6A项目的老师,我们的生信售后同事可以协助各位老师进行个性化绘制。
Peak在mRNA或基因的不同区域占比可以有效帮我们锁定后期研究的重点是gene body的哪个区域。而且也有助于从整体的peak分布寻找规律。例如5’UTR以及CDS在转录后调控有别于3’UTR区域,还会涉及到不同的阅读蛋白功能。
Motif分析主要为了说明大部分Peak具有共性的motif结构,如果在结题报告中的前Top20仍然无法找到诸如GGAC的结构,可能测序中存在一些噪音,剔除后就能获得高质量的motif结果,只要pvalue<0.01即可。
Motif分为m6A通用性motif和植物专属motif。前者为RRACH,后者为UGUAY或URUAY。
这些图主要为了展示m6A-seq以及其他测序如RIP-seq等在某个基因或某个区域信号值的强弱。这种图只能用IGV或UCSC browser等方式导出原始格式后,再使用Adobe AI、PS等软件进行修饰才能达到文章中的展示效果,并不能直接用软件导出。相关教程详细请点击:3篇10分客户文章教你m6A和RIP数据该如何挖掘 | RIP专题。
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