不就是个外显子测序吗？你们真是费尽了心机！

 摘要 

一直以来，人们都在坚持不懈地和各种疾病做斗争。外显子约仅占人全基因组的1-2%，却包含了85%的致病突变。外显子测序产品目标明确，只针对外显子区域，对于想要研究蛋白编码区域的研究人员来说是最经济有效的手段。结合大量公共外显子数据库如ESP等，能快速高效地解释疾病的致病机理和变异间的关联。外显子组测序技术以其经济有效的优势广泛应用于孟德尔遗传病、罕见综合征及复杂疾病和肿瘤的研究。那么，做外显子测序，为什么要选择华大？让我们来看看客户与华大工程师之间的对话，就知道为什么了。

 

我的毕业设计需要做外显子测序，现在市场上外显子测序供应商琳琅满目，选哪家好呢？ 

外显子测序华大就有呀，可以考虑选择与我们合作。

 

那可以详细介绍一下你们外显子测序产品技术线路和产品优势吗？

自从2010年发表国内第一篇外显子测序应用文章以来，华大基因在外显子测序产品的研发和投入上从未断过。联合自主开发的捕获平台、BGISEQ-500测序平台、BGI Online云计算信息分析平台，我们为研究者提供“多选、快速、精准”的外显子测序产品。以下是技术路线示意图。

产品优势

✦1、三种捕获平台：BGI 、Agilent 、Roche，高捕获率，高均一性

✦2、两种测序平台：BGISEQ-500、HiSeq，成熟、稳定、可靠

✦3、贯穿、严格、系统的质控体系

✦4、快至21小时的云基因数据分析服务平台

✦5、免费的个性化解决方案，强大内部数据库支持

✦6、全面可定制化的分析服务、完备的数据报告解读指导

✦7、超过10年以上的项目经验团队，参与众多国际大型项目

哦，产品如此丰富，可以详细给我介绍一下你们的自主捕获平台、测序平台和云计算信息分析平台吗？

当然可以。华大自主研发的BGI Exome V4 Kit，仅在不到三年的时间内就完成了超过1万例的样本。已经应用在惊恐性障碍和全身性肌张力障碍研究上。捕获探针基于主流数据CCDS、GENECODE、RefGene、miRBase设计，区间大小59Mb，测序数据在基因组上的比对率和覆盖度超过99%。建库、测序重复性均高于96%。

BGISEQ-500是桌面型、高通量、一站式、开放性测序平台，首款支持量产、适用于科研/临床的国产基因测序仪。采用优化的联合探针锚定聚合技术（cPAS）和改进的DNA纳米球（DNB）核心测序技术，是行业领先的高通量测序平台之一。双芯片独立运行，通量高达200Gb，一次运行支持20个外显子样品同时测序。不同于PCR指数扩增，滚环扩增技术的扩增错误不会累积，DNB与芯片上活化位点的大小相同，每个位点只固定一个DNB，保证测序信号点之间不产生相互干扰。使用BGISEQ-500测序平台的外显子下机数据碱基质量值Q20高达95%，高置信区间的SNP的精确度和灵敏度高达99%。目前该平台已经发表了5篇测序应用相关文章。

随着基因大数据时代的到来，华大基因凭借丰富的测序数据分析经验，开发了基于“云”的基因大数据分析服务平台——BGI Online。它为每位用户提供生物信息数据的存储、分析、共享。线上分析100X外显子测序数据只需要21小时，简单、高效。目前外显子测序产品已经全面实行线上信息和交付。

 

这几个平台，在国内外都享有很大的知名度，这一次终于能系统的了解了。另外，据我所知，外显子测序流程很长啊，经过了至少2次PCR，1次杂交洗脱。这么多过程，华大如何确保检测结果的准确性呢？

您说得没错，外显子测序流程复杂、步骤繁多。我们有做过统计，整个外显子的检测过程经过34次实验操作。

 

果然如我所料！但没想到竟有34次操作这么多！如果样本量多的话，很容易弄混的。

不用担心，华大有招。我们将外显子测序过程分为提取检测、文库构建、上机测序、信息分析4个大步，每一个节点都设置有质量控制点。

★提取检测：完成DNA提取后，我们会提供Qubit浓度检测和琼脂糖凝胶电泳图，明确DNA的质量和数据都是可以满足高通量检测需求的。这部分的检测结果，我们会提供检测报告交给客户。

★文库构建：外显子测序有3个主要的质控点，分别设置在杂交前PCR建库的DNA检测、杂交后PCR文库Q-PCR定量和片段检测，及将文库混合后再进行Q-PCR定量和片段检测。

★上机测序：对于外显子上机测序会同时加入标准文库做内参，根据内参的结果可以确定测序过程中机器和试剂是否处于可靠范围之内，从而对测序过程进行监控。

★信息分析：我们针对原始样品的特定位点采用质谱和waferGen分型两种方式确定变异位点，再与外显子高通量测序列信息分析结果中的变异位点进行比对，确保测序结果与原始样本为同一样本，避免实验过程出现样本混淆。

 

做个外显子测序竟然需要这么多的步骤，华大还设有这么多质控点，这样的结果肯定靠谱！

这些质控点是华大检测的基本要求，针对外显子测序华大专门建立了方法学验证和信息分析稳定性验证，从试验设计的角度论证了外显子测序的可行性。

★方法学验证是为了确保外显子测序过程是可靠的。我们采用120个已完成测序的千人项目中的样品作为标准样品，按照不同的人员、不同的仪器，制备200个文库，分别进行外显子测序。根据测序结果对外显子测序在重复性、准确性、特异性、灵敏性4个方面进行评估，最后验证结果显示，华大外显子测序结果的重复性、准确性、特异性、灵敏性都是达标的。从而确保外显子测序方法是可行的。

★信息分析稳定性验证是为了确保外显子测序后信息分析操作流程是稳定的。我们设计用3个（及3个以上）不同的技术人员完成同一个项目信息分析流程、同一个技术人员在不同时间完成外显子信息分析流程，最后评估测序结果是否一致。 评估结果显示，外显子信息分析额在不同人员、不同时间的检测，都可以得到一致的结果。

这些方法学验证，22个样品，88个测序结果，花了不少钱吧？

是的，方法学验证部分申请了超百万经费。靠谱的检测机构在质量管理的投入是巨大的，这些隐形的投入会全面确保您的样本质量和检测结果。华大更是如此，为了确保客户的样本质量和检测结果，我们每年在全面质量管理体系中的投入至少是七位数！

 

原来是这样的，看来华大会是一个值得信赖的合作伙伴。

华大科技，您的首选科研合作伙伴，详情请咨询4007066615或当地销售代表。

撰稿：方    程

编辑：市场部

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