新冠核酸检测，靶标越多灵敏度越高？权威评测结果有话说！
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1、啥叫靶标？就是新冠病毒基因组上的某一段特征序列，单靶就是选一段，双靶就是选两段，三靶就是选三段……全靶呢？那就是把病毒全基因组测个序……
2、针对远处的一个敌人，冲锋枪好还是狙击步枪好呢？当然是狙击步枪，集中能量，一击毙敌，靶标亦如此。冠状病毒需要非常高灵敏度的试剂才不会漏检，而靶标并非越多越好，靶标越多，引物和探针之间的干扰越大，灵敏度越低；样本反应的绝对试剂量是有限的，找的基因片段越多，整体的实验体系就会被分散得越厉害。所以，靶标越多，漏检的可能性也随之增加；
3、国家卫健委临床检验中心和FIND（世卫组织创新诊断基金会）的评价结果显示：单靶标试剂和双靶标试剂性能相比，具有更高灵敏度（平均ct值最小，可理解为更快确认阳性）；单靶标试剂对阳性样本的检出率要高于双靶标试剂。
近日，为验证新型冠状病毒核酸检测试剂的检测限（LOD）和临床性能，世界卫生组织（WHO）的诊断技术评估合作中心创新诊断基金会（FIND）选择了包括华大基因在内的4家公司的新型冠状病毒核酸检测试剂在日内瓦Hôpitaux大学进行了独立评估。
评估过程中，使用瑞士临床分离株培养所得的病毒以及E基因标准品进行LOD测试；从怀疑感染新型冠状病毒的个体中提取样本，基于Tib Molbiol进行PCR方案优化后进行临床性能分析。评估结果如下：
Gene target：靶点基因
Verified LOD：检测限
Clinical sensitivity:临床敏感性
Clinical specificity:临床特异性
在本次评估中，包括一种单靶标试剂（华大）及三种双靶标试剂。评估结果显示，在检测限方面，单靶标试剂和双靶标试剂性能相比，具有更高灵敏度（平均ct值最小）；在临床分析性能方面，华大基因新型冠状病毒核酸检测试剂在所有国内参评企业中特异性最好。
国家卫健委临床检验中心上周对“全国新型冠状病毒核酸检测室间质量”进行的评价结果也显示，针对要求必须检出的最低浓度质控品（640copies/mL），以华大为代表的单靶标试剂检出率为97.1%，而其余8个双靶标试剂的检出率58.3%~100%不等，平均检出率仅为85.4%，远小于单靶标的检出率，容易造成新冠核酸检测假阴性的问题。
什么是靶点？
我们对病毒做核酸检测是指，在实验室的条件下，通过分析致病微生物DNA或者RNA基因学的序列，进行临床病因学的确诊。而靶标就是要检测的病毒序列中的基因片段。
国家卫健委发布的《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南（第二版）》中推荐核酸检测选用的靶标为：ORF1ab和N gene。简单理解就是两个基因片段，检测一个基因片段就叫单靶，检测两个基因的片段叫双靶。
还有一种叫三靶，靶标除了ORF1ab和N gene，还多加了一个E gene。美国CDC首批自研的检测试剂盒就用的是三靶，但因为试剂的问题导致错误率太高而不合格，后来研发使用的一版采用了双靶。
靶标并非越多越好，因为引物和探针之间会相互干扰。在反应体系中，引物探针数量越多，干扰越严重，灵敏度越低。理论上讲，如果说一个靶标的特异性很强，靶标越少灵敏度就越高。
很多产品在营销宣传时误导人，靶标越多准确率就越高。其实不然，很多时候靶标越多，漏检的可能性反而越大。
这是因为，样本反应的绝对试剂量是有限的，找的基因片段越多，整体的实验体系就会被分散得越厉害。所谓的单靶、双靶、三靶都是一次实验做完的，假如说试剂量可以做三十次检测，都做单靶时，就等于一个靶可以查三十次；做双靶时，一个靶查十五次；而做三靶，一个靶平均只能查十次。可以理解为，试剂起始量越低，单靶的灵敏度最高。
△WHO最新发布的《实验室检测指南》明确指出，在新冠病毒流行地区，检测一个特异性靶标就已足够。
尹哥认为，在实际使用中，如果能够证明单靶的性能足够好， 没必要一定追求双靶和多靶。这就好比检测一个人是不是男性，只需要查他有没有Y染色体，而不需要看他是不是还有另外一条X染色体，Y染色体就是检测性别特异性最好的单靶标。
参考资料：
[1]中国新冠诊断试剂阳性率仅30%~50%？质评报告否认了https://m.yicai.com/news/100588161.html?from=timeline&isappinstalled=0[2]SARS-COV-2 MOLECULAR ASSAY EVALUATION: RESULTS
https://www.finddx.org/covid-19/sarscov2-eval-molecular/molecular-eval-results/推荐阅读
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