SOP文件 | 脑脊液标本细菌学检验标准操作规程

1 目的

规范脑脊液标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。

2 适用范围

脑脊液培养。

3 标本

3.1 标本类型：脑脊液

3.2 标本采集：由临床医师以无菌要求做腰椎穿刺，抽取脑脊液2 ~ 3ml，盛于无菌容器中送检。脑膜炎奈瑟菌离体后能产生自溶酶，迅速自溶，肺炎链球菌及流感嗜血杆菌离体后也易死亡。因此，脑脊液无论涂片或培养，必须采集后立即送检。

3.3 标本拒收标准

3.3.1 标本标识与化验申请单不符。

3.3.2 标本未用无菌试管留取。

3.4 标本保存：采集标本后立即送到实验室，不能及时送检可置室温，放置时间不应超过2小时切勿放冰箱，否则影响检出率。

4 试剂、仪器

4.1 革兰染液、氧化酶试剂、3%触酶、血琼脂平板、巧克力平板、麦康凯平板、相关生化试剂等。

4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡（GNI⁺）、革兰阴性菌药敏卡（GNS）、革兰阳性菌鉴定卡（GPI）、革兰阳性菌药敏卡（GPS）、药敏纸片等，有效期及储存条件参见试剂说明书。

4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、CO₂培养箱等。

5 细菌鉴定和药敏监控

参见《质量管理程序》。

6 检验步骤

接收标本后，立即对标本进行编号、登记。

6.1 涂片检查

6.1.1 一般细菌涂片检查：外观混浊或脓样脑脊液可直接涂片，无色、透明的脑脊液，应3000r/min离心10~15分钟后取沉淀物涂片、革兰染色、镜检。根据染色及形态特征，常可初步提示细菌的种类。

6.1.2 结核分枝杆菌涂片检查：参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。

6.1.3 新生隐球菌涂片检查：取脑脊液的离心沉淀物做墨汁负染色，或取脑脊液的离心沉淀物接种于沙氏培养基上，置于35℃培养3 ~ 5日，根据菌落特性，涂片染色镜检作出报告。必要时可作生化反应进一步鉴定。

6.2 分离培养

6.2.1 用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板、巧克力平板和麦康凯平板，置于5% ~ 10% CO₂环境中35℃培养18 ~ 24小时，观察细菌生长情况，根据菌落特点、形态与染色及生化反应鉴定细菌，并作药敏试验。

6.2.2  结核分枝杆菌培养：参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。

7 操作流程

8 结果报告

无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性细菌应立即电话或书面通知临床医师。查见细菌，报告菌名和药敏结果。经培养48小时，仍无细菌生长者，报告“培养2日无细菌生长”。

9 注意事项

9.1 抽取的脑脊液分置于无菌试管中，迅速送至实验室，病毒、真菌、分枝杆菌培养样本置4℃保存待送。

9.2 流感嗜血杆菌容易在外界环境中死亡，脑膜炎奈瑟菌对寒冷和干燥均很敏感，在体外容易自溶，故不论是涂片镜检还是进行培养，均应及时送检。

10 临床意义

正常人的脑脊液是无菌的，检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈瑟菌，肺炎链球菌居第二位。3个月至5岁儿童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆菌，新生儿脑膜炎多由大肠埃希菌、B群溶血性链球菌和脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产婴儿。结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。85%脑脓肿病人脑脊液培养可检出厌氧菌，有时可为厌氧菌和需氧菌混合感染。

11 危急值报告

直接涂片找到细菌或培养阳性均作危急值报告。若检测出脑膜炎奈瑟菌则应做传染病报告。

12 相关文件及记录表格

***-JYK-***-WSW***  质量管理程序

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