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为什么要6-8小时才能拿到新冠病毒核酸检测报告?

检验星空 2022-08-26

以前,大家相约吃饭唱歌KTV;现在,大家相约核酸检测也成为一种社交!

走到采样台前,总是有很多困惑:

天天都在说的“核酸检测”,到底是什么呢?

Q1:什么是核酸检测?

“医生,我要做核酸!”

“请问你是做哪个项目的核酸检测?”

“啊?难不成还有其他核酸检测吗?”

目前,大众一提到核酸检测,自动认为“核酸检测=新冠检测”。其实,新冠病毒核酸检测只是核酸检测的其中一项。核酸检测方法广泛应用于病原微生物检测中,作为诊断疾病监测病毒载量重要手段,例如,我们熟知的乙肝病毒DNA定量检测、人乳头瘤病毒(HPV)检测、人免疫缺陷病毒(HIV) RNA检测等。因此,从检测范围来讲,“核酸检测>新冠检测”。

那么,什么是核酸呢?

核酸是地球上几乎所有生物的遗传物质,核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。病毒核酸位于病毒的内部,病毒的外部是由蛋白或者脂蛋白组成的保护型外壳。核酸能决定病毒的毒性、传播性、变异性等特性,是区分每种病毒最精准的标识。

Q2:采嘴巴?捅鼻子?为啥不采血呢?

目前,呼吸道病毒核酸检测常规的样本采集方式包括:咽拭子及鼻咽拭子。也就是俗称的“捅鼻子”和“捅喉咙”。

 “医生,那到底哪种舒服点?”

“嗯……这个就因人而异了,每个人不同部位的敏感性不同嘛,但都不会很舒服。对检测而言,鼻咽拭子的准确性更高一些”。

“医生,那这个核酸检测能不能采血嘛?”

“不能……”

因为,呼吸道病毒感染人体之后,首先会在呼吸道上皮细胞中“扎根”繁殖。因此,上呼吸道标本(鼻咽拭子、咽拭子、痰液以及肺泡灌洗液)检测的阳性率是最高的。由于在感染病毒的初期,病毒可能还没有侵入到患者的血液,此时检测血液中的病毒核酸很可能会是阴性,这样的假阴性结果就会导致漏检。

Q3: 核酸检测是怎么“抓捕”病毒的?

第一步:保存及运输

采样后,将拭子放入病毒保存液中。病毒保存液可保持病毒的活性与完整性。同时保存液中含有多种抗生素,这样可以抑制样本中其它细菌和真菌的生长,打倒了“竞争伙伴”,病毒就可以独占“ 舒适”的环境,在这片乐园里“自由自在”地生活了。

第二步:震荡。

病毒采样管送到检测实验室后,进行充分震荡,将拭子上粘附的呼吸道上皮细胞及病毒一个都不能少“抖落”到保存液中。

第三步:提取核酸

(1)  裂解

用胍盐使蛋白质外壳变性。把这层花花绿绿的蛋白质“马甲”给拔了,才能将病毒的核酸释放出来,露出病毒的“真面目”。

(2)  结合

加入磁珠与核酸结合。与各种细胞碎片、蛋白质……说“拜拜”啦!

“我们的目标是?”

 “抓住核酸!”

(3)洗涤

结合一次就能抓到核酸了?哪有那么轻松哦!抓是抓到了,不过还是有少量碎片、蛋白还是跟着核酸一起被黏上了。如何提高核酸的纯度?我们有两大法宝:加盐,加酸。

 “吸附核酸-高盐低pH”

 “洗脱核酸-低盐高pH”

反复两三次的吸附、洗脱,实现核酸的提取纯化。剩下的就是“赤裸裸”的核酸啦。

第四步:检测核酸

呼吸道病毒核酸检测常规筛查采用的是实时荧光PCR方法。PCR技术于 1983年由美国著名化学家凯利·穆利斯(Kary Banks Mullis)发明的,并获得1993年诺贝尔化学奖

PCR反应就像一个大型装配车间。想要扩增某个病毒片段,首先根据它的特点设计一对引物。引物就是最有力的识别并定位的“抓手”,具有“指哪打哪”的精确性。在一群病毒核酸中,想抓新冠还是流感,抑或是鼻病毒、呼吸道合胞病毒等,只有你想不到的,没有他抓不到的。

当他识别到“目标”病毒的“特点”——特异性的片段,马上一前一后“抓捕”,再添加dNTP、Mg2+、Taq酶等原材料,调节不同的温度,历经“变性-退火-延伸”三大步,完成病毒核酸组装。每扩增一次,DNA产量呈指数增长。新冠病毒扩增一般需要40个循环,理论上1个拷贝可以得到240=1,099,511,627,776个拷贝。即使样本中病毒含量很低,都可以通过PCR扩增检测出来。因此PCR反应有高特异性高灵敏度的特点。

240个核酸片段拷贝,数量是很多,但无色无味又看不见,“敌在暗处”怎么办?那我们就让他在“明处”!实时荧光PCR反应就是在PCR反应基础上加入探针,每扩增出目标片段即会发出荧光,被荧光探测器捕获。

随着扩增次数的增加,荧光量累积,就是我们看到的曲线图了,我们就是通过它来判断有没有病毒了。

 “咦,医生,为啥阳性曲线图和阴性曲线图里面都有个阳性的曲线喃?是不是阴性被污染了哦?”

“莫慌,那个是人类管家基因,就是人类所有细胞都稳定表达的基因。”

“我是查新冠病毒,做这个什么“管家”来干啥呢?”

“这个是用来监测采样、运输以及检测过程的!”

“哦!我终于知道为什么要第二天拿核酸报告了,我还以为你们采了样放上机器就出结果了,原来还有这么多步骤!”

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