核移植过程中用到了哪些技术

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动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等，其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。实际上每种技术都不是孤立存在的，都是多种技术的结合。本文就来谈谈动物体细胞核移植技术过程中用的技术有哪些。

1.动物细胞培养

从供体取出的体细胞要培养待用，当然用到动物细胞培养技术。

2.显微操作技术

在去除卵母细胞的细胞核时用普遍使用显微操作去核法。还有人采用其他方法，如梯度离心、紫外光短时间照射、化学物质处理等。这些方法是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下，去除细胞核或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核的目的。

另外这里还应注意一个问题：核移植为什么常用去核的MII中期的卵母细胞？

这是由于第一极体与中期染色体位置很近，可以通过去除极体附近的部分细胞质的方法把中期染色体去掉。这个时候的卵母细胞没有细胞核只有中期染色体，示意图中的红色点代表的是第一极体，圆圈代表中期染色体。  核移植常用MII中期卵母细胞作为受体细胞，当然也可以用GV期、MⅠ中期、MII后期的卵母细胞甚至去核合子作为受体细胞。至于为何用MII中期的卵母细胞，这是因为绝大多数哺乳动物从卵巢排出的卵母细胞都位于MII中期。这些卵母细胞只有在受精或人工激活后才完成减数第二次分裂，因此MII中期卵母细胞最容易获得。此外，由于MII中期卵母细胞内成熟促进因子（MPF）活性高，对移入的供体核重编程有利，核移植效率也较高。因此，鉴于MII中期卵母细胞容易获得和去核，核移植胚胎发育率也相对较高，人们一般都直接用MII中期的卵母细胞作为受体细胞。

3.动物细胞融合技术

从图中可以看出，这里讲体细胞核移植是将供体细胞整个注入去核的卵母细胞。而平时讲动物细胞核移植时，都是说将供体细胞的核取出，再移入去核的卵母细胞。 是不是矛盾了呢？实际操作是怎样的呢？

体细胞核移植技术最初是用玻璃微型吸管将供体细胞的细胞核吸出，再注入到去核卵母细胞内，后来通过实验的不断摸索发展出了另外一种方法，即直接将供体细胞注入到去核卵母细胞透明带内，然后用病毒介导或者电脉冲等方式使两个细胞融合，因为这种方法操作简便，对卵母细胞损伤较小，现在较为常用。由于是将整个细胞注入卵母细胞透明带内的，接下来要进行细胞融合，所以用到细胞融合技术。

4.早期胚胎培养技术

供体体细胞与去核卵母细胞融合以后形成重组细胞（胚胎），并不能立即进行核移植，而需要培养到一定程度才能移植（不同的动物其胚胎进入子宫时的发育程度不同，这就要求胚胎移植时的胚胎要发育到相应的程度），这个过程就是早期胚胎培养。

5.胚胎移植技术

将构建的重组胚胎移入受体（代孕）母牛体内，当然用到了胚胎移植技术。

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