聚焦药靶I MET靶点药物临床进展及其伴随诊断解决方案

近期，日本MHLW和美国FDA批准了多款MET抑制剂及其伴随诊断产品上市，可为之前不能获得靶向治疗的MET 14外显子跳跃突变患者提供新的治疗方案。

MET ex14跳跃突变靶点获批药物简述

2020年3月25日日本厚生劳动省（MHLW）批准了德国默克制药的MET抑制剂Tepmetko（Tepotinib，特泊替尼）上市，用于治疗不可切除、MET外显子14跳跃突变的晚期或复发性非小细胞肺癌（NSCLC）患者。这是全球首款针对于MET 14外显子跳读突变的口服MET抑制剂。与此同时，厚生劳动省（MHLW）也批准了美国ArcherDx公司的Archer MET CDx产品作为Tepmetko（特泊替尼）的伴随诊断产品，可用于同时检测组织和血液中的MET 14外显子跳跃突变^[1]。仅两个月后，美国FDA也批准了美国首款、全球第二款用于治疗具有转移性NSCLC（MET 14外显子跳跃）成人患者的诺华公司产品Tabrecta（capmatinib，卡马替尼）上市。同日，FDA还批准了Foundation Medicine公司的FoundationOne CDx（F1CDx）产品作为Tabrecta（卡马替尼）的伴随诊断^[2]。在美国，非小细胞肺癌约占肺癌中的80-85%甚至更高^[3]，携带有MET 14外显子跳跃突变的患者约占肺癌患者中的3-4%，携带有此类突变的患者预后普遍较差^[4]。FDA卓越肿瘤中心主任Richard Pazdur博士表示，Tabrecta的上市可以为之前不能获得靶向治疗的MET 14外显子跳跃突变患者提供新的治疗方案。

MET ex14跳跃突变分子机制及常用检测方法

MET受体基因（Mesenchymal Epithelial Transition）属于酪氨酸激酶受体（receptor tyrosine kinases, RTKs）超家族，位于人类7号染色体长臂（ 7q21-31），含有21个外显子和20个内含子，长度约125 kb，编码的蛋白大小约为190kDa^[5,6]。MET 14外显子跳跃突变通常并不与EGFR、 KRAS、 ALK等肺癌其他突变共存，提示MET 14外显子跳跃突变是原发致癌驱动基因^[7]。当发生MET 14外显子跳跃突变时，Y1003和c-Cbl的结合位点缺失，从而导致受体泛素化降低^[8]， MET蛋白质降解，使MET持续激活^[9]，并作为原发致癌驱动基因。

MET 14外显子跳跃突变形式多样，目前，以RNA/DNA为基础的NGS是最常用检测技术。一般而言，以RNA为基础的NGS所涉及Panel中的基因数量要少于DNA测序Panel中对应的基因数量^[10,11]。

美国癌症基因研究组( The Cancer Genome Atlas， TCGA) 通过对 mRNA和DNA高通量测序结果及序列对比分析，发现约 4% (10 /230) 肺腺癌患者存在 MET14 号外显子跳跃突变( exon 14 skipping)，导致 MET 第14号外显子在 mRNA水平出现部分或完全跳跃缺失突变^[12]。

在科罗拉多大学Kurtis教授的一项研究中，采用了基于DNA和RNA的两种NGS技术分别对MET 14外显子跳跃进行了检测，结果表明，基于DNA的NGS方法在856个NSCLC患者中检测到了11例阳性患者（1.3%），基于RNA的NGS方法在404个样本中检测到了17例阳性患者（4.2%）。在286例同时采用DNA/RNA检测的样本中，基于RNA检测的方法检测到了10例阳性，其中的6例都是基于DNA检测的方法所不能检出的^[13]。

采用RT-PCR对MET 14外显子跳跃进行检测并不容易，最大的挑战在于在14外显子上发生的跳跃突变不仅包括了在剪接供体和受体位点出现的常规碱基取代、插入/缺失，还可能会涉及整个14外显子的缺失^[14]。如何通过引物设计实现对可能引起跳跃的各类突变灵敏检出将是影响结果的关键所在。

除此之外，MET 14外显子跳跃突变还常伴有免疫组化（ immunohistochemistry, IHC）下的ME T过表达。因此，可以先用IHC对患者进行初筛，缩小目标人群^[9]。

部分MET靶点基因突变临床研究情况一览

由于非小细胞肺癌的遗传异质性，虽然已经有多种替尼类药物能够起到靶向治疗和缓解的作用，但由于人体本身的复杂性以及诸多基因突变、旁路激活等因素的影响，使得各种替尼类药物在使用过一段时间之后都会不可避免地出现耐药反应。

MET 14外显子跳跃突变的发现及准确鉴别，正在帮助更多候选药物成为具有此类突变患者的有效靶向治疗选择。部分MET基因靶点相关药物临床进展情况如下表所示：

 表1  Clinical trial网站部分MET靶点在行临床试验列表

序号	药品名称	招募人数	临床阶段
1	Glumetinib	68	1,2
2	Crizotinib	80	2
3	Merestinib	12	2
4	Spartalizumab，Capmatinib	270	2
5	Capmatinib， Docetaxel	90	3
6	Capmatinib	60	2
7	Capmatinib	27	2
8	APL-101 Oral Capsules	201	1,2
9	TPX-0022	120	1
10	INC280	368	2
11	Capmatinib	27	2
12	Sym015	72	1,2
13	MGCD265	68	2
14	Tepotinib，Osimertinib	120	2
15	Tepotinib	280	2
16	Glumetinib	70	1,2
17	Volitinib	20	2

中国MET靶点药物研发进展

据统计，我国每年新增肺癌病例超过77.4万例，占全球肺癌新增病例的37%^[15]，其中MET外显子14跳跃突变的非小细胞肺癌新增病例约12,000至20,000例。

和黄中国医药科技有限公司于7月28日宣布，中国国家药品监督管理局（NMPA）将沃利替尼（savolitinib）用于治疗间质上皮转化因子（MET）外显子14跳跃突变的非小细胞肺癌（NSCLC）的新药上市申请纳入优先审评。这是沃利替尼在全球范围内的首个新药上市申请，也是中国首个选择性MET抑制剂新药上市申请^[16]。

沃利替尼是一种强效、高选择性的口服小分子MET抑制剂。迄今为止，沃利替尼已在全球范围内逾1,000名患者中开展研究。临床试验显示，沃利替尼在多种MET基因异常的肿瘤中均表现出了良好的临床疗效，并且具有可接受的安全性特征。

泛生子在MET靶点的优势

考虑到我国NSCLC患者的遗传背景与大部分靶向药物诊断的高加索人种有所不同，例如我国NSCLC患者中EGFR的发生率约为28.2%，远远高于西方人群中的10%^[17]。而对于MET14外显子突变的统计学内容现在还在不断的完善过程中。这就使得在中国患者人群中需要对MET 14外显子跳跃的精准检测更加意义重大。

泛生子一直致力于NGS的技术研发、肿瘤药物靶点检测及数据积累。今年2月份，泛生子的人类8基因突变联合检测试剂盒（半导体测序法）（国械注准20203400072，以下简称泛生子肺癌8基因试剂盒）获国家药品监督管理局批准上市（点击链接了解更多），该试剂盒是首款获批搭载泛生子“一步法”专利技术的肺癌临床诊断试剂盒，可一次性检测与非小细胞肺癌患者靶向治疗密切相关的8个基因突变和融合—EGFR / ALK / ROS1 / BRAF / KRAS / HER2 / MET / PIK3CA，其中对于MET靶点的主要检测及伴随诊断优势体现如下：

1

国内首个NMPA获批的MET 14外显子跳跃试剂盒

在开展试剂盒注册的临床前和临床研究阶段，分别进行了1000+例规模的肺癌样本检测，MET14跳跃的检出率为2.4%～2.6%，该比例与已报道数据接近一致；方法学对比研究数据显示，MET 14跳跃的阳性符合率和阴性符合率均可达到95%以上，这两组数据均充分说明了本试剂盒检测方法的可靠性。

2

基于原研技术“一步法”,大大节约样本用量

在药物临床试验开展过程中，可能会面临着因样本量少而导致无法有效的开展药物相关biomarker 检测及探索性研究的困难，由此可能会造成对药物疗效评估存在一定局限性的问题，泛生子原研技术“一步法”是一种可定制化开发的快速建库捕获技术，具有检测周期短，样本用量少，文库峰值表现好及检测更经济等特点，基于这些优势一步法已被应用于多项临床试验的开展。首先，一步法对样本类型具有很好的兼容性，石蜡切片，穿刺样本,新鲜组织，血液，唾液等样本类型均有相关检测产品可覆盖；其次，一步法可以有效节约样本用量，整个反应体系将传统实验过程中的打断，纯化，加接头，PCR等多个分步骤的反应优化到了一管反应体系中，即可降低样本损耗，又可避免交叉污染的可能。泛生子肺8检测试剂盒正是基于一步法技术，对MET 14跳跃可以在满足RNA起始量≥50ng时开展快速检测, 样本起始量只需1-3张FFPE（肿瘤组织含量不少于20%）。

3

可搭载已获批测序仪实现院内快速检测，提前布局

随着创新药物伴随诊断趋势的越发明朗，很多药企伙伴在临床试验阶段便会提前考虑未来药品上市后的商业化布局事宜，而这往往会跟药物伴随诊断需求结合在一起成为伴随诊断策略的综合考量因素。泛生子一直致力于打造全周期，闭环式的精准肿瘤诊疗生态链，在药企服务版块，目前已形成包括C-MET、NTRK、FGFR、TMB、IDH等多个热门靶标在内的多平台解决方案，可以结合靶点与药物作用机理、临床试验不同阶段的检测需求、伴随策略综合为合作伙伴提供科学、专业的指导建议。肺癌8基因试剂盒搭载泛生子已获批测序仪GENETRON S5(国械注准：20193220820)及全自动加样系统GENETRON Chef（渝械注准20192220364）,配合自动化报告出具系统，可在临床院内实现2-3天的快速检测，为广大患者的治疗争取宝贵时间，这种对临床终端检测刚需的解决方案，同时将非常有助于推动基于本试剂盒开展伴随诊断的药物未来的商业化布局。

表2  目前可公开的泛生子合作C-MET药物临床试验招募列表

登记号	药物名称	试验专业题目	适应症
CTR20191957	伯瑞替尼肠溶胶囊	一项在c-Met异常的晚期NSCLC患者中评估伯瑞替尼肠溶胶囊有效性和安全性的多中心、多队列、开放的II期临床研究	经组织学或细胞学证实的晚期非小细胞肺癌患者（c-Met异常，同时EGFR wt、ALK重排阴性、ROS1重排阴性、KRAS突变阴性；）

*申办者名称：北京浦润奥生物科技有限责任公司

MET伴随诊断方案

目前已有多款NGS的panel用来对众多基因和药物靶点进行检测，但获批的只有极少数。对大多数靶向药物而言，其依然处于开发和临床验证阶段，对于这些药物的指导使用越来越离不开配套的伴随诊断试剂，这一过程需要通过不断地收集药物疗效相关性数据来加以证明和调整，因而这将是个不断持续的工作。

与制药企业的不同的是，伴随诊断试剂生产企业可以先期完成各个靶点的分析性能验证，保证检测准确性，从而获得相关监管部门的批准，随后在通过与制药企业合作，来扩展相应靶点伴随诊断的预期用途。

Foundation one CDx即采取了类似的方式，从FDA 对Tabrecta（capmatinib，卡马替尼）的批准可知，FoundationOne CDx（F1CDx）是一款可以针对324个基因进行替换、插入、缺失、拷贝数改变（CNAs）以及选择基因重排进行检测的产品，与此同时还可以从对从FFPE片子中提取的核酸进行微卫星不稳定性（MSI），肿瘤突变负荷（TMB）等检测。

目前NMPA对于伴随诊断临床验证和注册审批的要求也日益明确，最新公开的《已上市抗肿瘤药物的伴随诊断试剂临床试验指导原则(征求意见稿)》强调伴随诊断试剂临床试验分为两部分：“一部分为临床检测准确性研究，一部分为伴随诊断用途的临床验证。”中美两个药监部门在对于伴随诊断领域的监管模式非常类似，这不仅为伴随诊断试剂企业带来了产品验证的便利性，更相当于为制药企业提供了精准用药方向上的专业判断。监管部门的上市批准在很大程度上保证了这些伴随诊断试剂的性能是优异和可靠的。制药企业可以选择这些已上市伴随诊断检测试剂来与相应的靶向药物进行精准治疗配套，一方面可以增加对临床试验结果的保障，另一方面也可有效缩短对相关靶向药物获批的评审周期。

泛生子肺癌8基因试剂盒是国内首款获批基于RNA水平检测MET14外显子跳跃变异的NGS产品，我们非常欢迎与相关制药企业合作完成更多MET靶向药物的伴随诊断临床验证，增加指导特定药物用药的临床适应症，为更多患者带来精致治疗的福音。

药企合作需求咨询邮箱：[e-mail]

参考文献（向上滑动阅览）

［1］Merck. TEPMETKO (Tepotinib) Approved in Japan for Advanced NSCLC with METex14 Skipping Alterations. 2020  2020-03-25]; Available from: https://www.merckgroup.com/en/news/tepotinib-25-03-2020.html.

［2］FDA. FDA Approves First Targeted Therapy to Treat Aggressive Form of Lung Cancer. 2020; Available from: https://www.fda.gov/news-events/press-announcements/fda-approves-first-targeted-therapy-treat-aggressive-form-lung-cancer. 

［3］NCI. What is the lung cancer. Available from: www.cancer.org/cancer/lung-cancer/about/what-is.html

［4］Awad, M.M., et al., MET Exon 14 Mutations in Non–Small-Cell Lung Cancer Are Associated With Advanced Age and Stage-Dependent MET Genomic Amplification and c-Met Overexpression. Journal of Clinical Oncology, 2016. 34(7): p. 721-730.

［5］Solomon, B.J., et al., First-line crizotinib versus chemotherapy in ALK-positive lung cancer. N Engl J Med, 2014. 371(23): p. 2167-77.

［6］ Salgia, R., et al., The promise of selective MET inhibitors in non-small cell lung cancer with MET exon 14 skipping. Cancer Treat Rev, 2020. 87: p. 102022.

［7］ Frampton, G.M., et al., Activation of MET via diverse exon 14 splicing alterations occurs in multiple tumor types and confers clinical sensitivity to MET inhibitors. Cancer Discov, 2015. 5(8): p. 850-9.

［8］Onozato, R., et al., Activation of MET by gene amplification or by splice mutations deleting the juxtamembrane domain in primary resected lung cancers. J Thorac Oncol, 2009. 4(1): p. 5-11.

［9］Drilon, A., et al., Targeting MET in Lung Cancer: Will Expectations Finally Be MET? J Thorac Oncol, 2017. 12(1): p. 15-26.

 ［10］ Kim, E.K., et al., Molecular Diagnostic Assays and Clinicopathologic Implications of MET Exon 14 Skipping Mutation in Non-small-cell Lung Cancer. Clinical Lung Cancer, 2019. 20(1): p. E123-E132.

［11］Champagnac, A., et al., Frequency of MET exon 14 skipping mutations in non-small cell lung cancer according to technical approach in routine diagnosis: results from a real-life cohort of 2,369 patients. Journal of Thoracic Disease, 2020. 12(5): p. 2172-+.

［12］ Cancer Genome Atlas Research, N., Comprehensive molecular profiling of lung adenocarcinoma. Nature, 2014. 511(7511): p. 543-50.

［13］ Davies, K.D., et al., DNA-Based versus RNA-Based Detection of MET Exon 14 Skipping Events in Lung Cancer. J Thorac Oncol, 2019. 14(4): p. 737-741.

［14］Schrock, A.B., et al., Characterization of 298 Patients with Lung Cancer Harboring MET Exon 14 Skipping Alterations. J Thorac Oncol, 2016. 11(9): p. 1493-502.

［15］ Observatory, T.G.C., Global Cancer Observatory. China Fact Sheet. 2019.

［16］和黄医药. 和黄医药宣布沃利替尼用于治疗非小细胞肺癌的中国新药上市申请纳入优先审评. 2020; Available from: https://www.chi-med.com/sc/nda-for-savolitinib-in-nsclc-granted-priority-review-in-china/.

 [17] Liu, S.Y., T. Mok, and Y.L. Wu, Novel targeted agents for the treatment of lung cancer in China. Cancer, 2015. 121 Suppl 17: p. 3089-96.

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