答疑干货全放送：蛋白分子高级结构和聚合体的生物物理表征

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直播回放

亲爱的小伙伴们，大量干货来袭！9月14日，药明生物分析科学部执行主任曹晓林博士以及分析科学部副主任李文博士，为大家带来的蛋白分子高级结构和聚合体的生物物理表征讲座回放来啦。在讲座中，我们收到了许多观众踊跃的提问，由于时间关系，讲者无法一一在讲座中回答。为了更好地为大家答疑解惑，我们将直播中未回答的问题答案和直播回放发布在下方，欢迎小伙伴们收藏观看。

Q: 请问有些产品蛋白浓度是<1mg/mL，例如融合蛋白。对于这类低浓度的样品，有什么好的办法分析吗？特别是在制剂buffer中的状态（例如高级结构）。

A: <1mg/mL(~0.1-1mg/mL)的融合蛋白可以通过圆二色谱或FTIR表征蛋白二级结构的一致性；也可以用AUC分析蛋白在buffer中的聚集状态。如果浓度太低，可以考虑先对样品进行浓缩到合适的浓度再检测。

Q: 请问是否有一些计算模拟的方法，预测蛋白聚集？

A: 暂时没有看到计算模拟的方法；建议进一步查看文献。

Q: 请问聚体和片段的表征是否在临床III期之前完成？是否有电荷异质体的表征业务？

A: 根据BLA filing要求，PC阶段需要有GMP批次结构表征，通常是在临床III期前完成的。药明生物可以提供电荷异质体的表征服务。

Q: 蛋白的物理结构及其生物学活性的相关性怎么来评价和检测？

A: 蛋白物理结构变化会导致理化性质改变和生物学活性丧失。临床后期阶段，会评价药物关键质量属性COA, 需要表征强力降解样品的生物物理结构（高级结构和聚集体表征）和生物学活性，从而可以了解蛋白物理结构变化和活性的相关性。

Q: DLS检测对多肽分子结构有什么要求吗？

A: 通常粒径在1nm-10μm大小的颗粒样品DLS都可以检测, 对分子结构没有特殊要求。

Q: ADC的payload有手性，是否适合做CD？

A: 圆二色谱主要用于表征蛋白类样品的高级结构，ADC样品可以适用于CD，结果也是反映整体手性，以蛋白为主。 

Q: 目前看这些方法，都是用于检测蛋白结构的。请问蛋白聚集主要和蛋白结构变化有关对吗？

A: 蛋白结构或构象的变化会导致蛋白聚集或聚集体形成，因此二者是有关联的。

Q: 消光系数测定时的吸光度是280nm还是280-330nm呢？

A: 消光系数检测时测定的吸光度是在280nm 下进行检测。

Q: AUC测不同浓度样品之前是不是会统一稀释到同一浓度用于测试？

A: AUC检测样品通常会稀释到吸光度最优的浓度（0.8-1.0）进行测试。对于同一个项目用于比较性研究的不同批次样品会稀释到同一浓度测试，以便对结果进行比较。

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药明生物在中国、美国、爱尔兰、德国和新加坡拥有超过10000名员工。凭借这些员工组成的专业服务团队，以及卓越的技术和洞见，公司为客户提供高效经济的生物药解决方案。截至2022年6月底，药明生物帮助客户研发和生产的综合项目高达534个，其中包括14个商业化生产项目。

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