RNA提取实验常规样本采集（三） | RNA专题
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不知不觉，我们的RNA提取专题已经过去了那么多期，小伙伴们觉得这些对你有没有帮助呢？我们总计13期的RNA专题马上就要暂时地告一段落了。小伙伴们还想获得什么干货呢？欢迎留言给我们呦~
现在先让我们回顾一下往期的精彩内容：
1. RNA提取的那些事
2. 困难组织的RNA提取总结
3. RNA不稳定原因分析
4. 改善RNA提取质量的方法
5. RNA纯度和完整性鉴定
6. 不同物种RNA质检图介绍
8. RNA提取特殊案例介绍
10. RNA提取实验常规样本采集（一）
11. RNA提取实验常规样本采集（二）
前两期我们已经讲述了一些常规样本的采样。今天我们来说说体液、石蜡、细菌、真菌样本的采集。
1、收集 5- 10ml 新鲜尿液、胆汁或者腹腔引流液，置于 4°C 或冰盒中正立放置
之后转移至 15- 50ml 锥形底的离心管中。
2、4°C ，1000 rpm ，离心10 min（去除细胞及碎片）。
3、小心转移上清到新的 15- 50ml 锥形底的离心管中（注意不要转移沉淀）。
4、4°C ，2500 rpm ，离心10 min（ 去除残留的碎片及细菌细胞）。
5、转移上清至新的 2.0ml EP 管中，严格封口。
6、- 80°C长期保存。
注意：
脑脊液、尿液、乳汁、精浆、细胞上清等体液样本通常RNA含量极低，所以该类样本的送样原则：越多越好，最少不能少于20ml，通过样本富集以达到RNA富集的目的。
石蜡包埋样本有2种准备方式：石蜡切片、石蜡中心组织块
1、石蜡切片：
RNA提取1次≤80um。
用石蜡切片机切成5-20um的切片，如用于miRNA实验，切片厚度≥10um。将石蜡切片转到螺纹冻存管，迅速浸入液氮中，冷冻>1h，之后转至-80℃长期保存。
2、石蜡中心组织块：
RNA提取1次需35mg样本。
取石蜡包埋样本中心组织块（不取暴露于空气中的组织截面部分）于螺纹冻存管中，迅速浸入液氮中，冷冻1>h,之后转至-80℃长期保存。
注意：
石蜡样本通常以石蜡切片为主，选取的切片必须是组织含量高的部分，至少提供5-10片10um厚度的切片。
一次反应所需细菌的量≤1 X 107个
1、显微镜下观察细菌生长状态，收集对数期的细菌。
2、将适量体积的菌液转移至 2ml 旋盖尖底离心管 （RNase-free）中，于室温下 14000g 离心1min。
3、弃尽培养基，将细菌沉淀迅速置于液氮中冷冻>1h，然后转移至 -80℃或液氮中长期保存。
4、运输方式：干冰运输。
注意：
不允许寄送有毒性、致病性的细菌，尽量以沉淀的形式寄送，勿以液体形式寄送，实验发现特别是菌类样本，菌沉淀的RNA抽提质量往往好于菌液。
一次反应所需真菌的量≤50mg
将真菌称重，分装多管；将称重后的真菌置于预冷的螺纹冻存管中，迅速投入液氮，速冻时间>1h，转入-80°C长期保存或用干冰直接寄出。
Total RNA一般长期保存于-80℃冰箱，若要寄送可直接使用干冰寄出，或加入适量保存液，再用干冰运输。
RNA的保存介质：
① RNA保存液（1/10体积3M NaAc，pH5.2， 3倍体积无水乙醇）。
② 3倍体积无水乙醇 。
③ Rnase-free水（送样量>15ul）。
注意：
(1)total RNA中应尽量避免多糖、蛋白、DNA等杂质的残留，送样时需注明溶剂成分。
(2)total RNA应避免反复冻融，由于反复冻融所产生的剪切力会对RNA样品有破坏作用，所以在实际操作中，应对RNA样品小量分装。
好了，本期RNA提取专题小课堂就到这里了。
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