你知道血清，血浆的这些知识点吗？|微量循环样本

上周为大家介绍了专门为临床微量循环样本而优化的lncRNA芯片和ceRNA芯片（用“芯”让微量循环样本不再难做），今天小编就来给大家科普最常见的两类微量样本——血清和血浆。

1.全血、血清、血浆的区别？

全血（如图1号管所示）：将人体血液采集到采血袋内所形成的混合物称为全血，即包括血细胞和血浆的所有成分。

血浆（如图2号管所示）：将全血加入抗凝剂后离心得到的上清液，抗凝剂的存在阻断了凝血反应，使凝血过程受阻，纤维蛋白原还存在于血浆中。

血清（如图3号管所示）：全血发生凝血反应后形成的上层淡黄色透明液体，凝血的主要反应是纤维蛋白原转化为纤维蛋白，所以血清中不再含有纤维蛋白原。

小知识：

1.全血由血细胞和血浆组成。

2.血浆可以通过去除纤维蛋白原等凝血因子形成血清。

3.血清、血浆组成复杂，含有外泌体及多种循环RNA，如lncRNA，circRNA及miRNA等。

2.血清、血浆如何分离？

分离流程如上图所示：

血浆：

1.取全血于已加入抗凝剂的抗凝管中，轻轻颠倒10次；

2.室温1200Xg离心10min，转移至1.5mL离心管中;

3.1300Xg离心2min，取上清液，-80℃保存（避免反复冻融）。

血清：

1.取全血于医用血清管中，轻轻颠倒5~8次；

2.室温放置30min;

3.室温1800Xg离心10min，转移至1.5mL离心管中;

4.1300Xg离心2min，取上清液，-80℃保存（避免反复冻融）。

小知识：

血清分离步骤中比血浆多了一步室温放置30min的过程，目的是让全血充分发生凝血反应。

3.血清、血浆分离的注意事项？

血清、血浆分离过程中特别需要注意两点：防止溶血和细胞混入。小编特地询问了实验室里的专家，请他说说分离血浆血清样本的窍门：

1.快：血液离开人体后，血液环境的稳定性与保存时间的长短呈反比，细胞膜的稳定性也在下降，在这种情况下，应尽快开展血清、血浆的分离，并严格按照操作说明进行，避免出现溶血现象，血清、血浆分离后务必避免反复冻融。

2.慢：离心速度不能过快，过快的离心速度会造成红细胞压积，容易产生溶血。

3.冷：血液样品如不能马上进行血清或血浆的分离，则尽量冷藏保存和运输，但是，绝对不能冷冻，否则血细胞会形成冰晶造成细胞破裂而溶血。

小知识：

1.溶血现象：即因红细胞细胞膜的破裂而导致的红细胞破碎、血红蛋白溢出的现象。溶血可由多种物理或化学因素引起，尤其在人体外，渗透压的变化、机械外力，温度的变化，酸碱度的变化或血液处理的过程中人为添加的一些化学物质，均有可能引起不同程度的溶血。

2.抗凝剂选择：不同的抗凝剂有其不同的分子构型，会对血液中各细胞的细胞膜产生不同的作用，有的会增加细胞膜的稳定性，有的会降低细胞膜的稳定性，所以选择一款合适的抗凝剂至关重要（抗凝剂推荐：EDTA、柠檬酸钠；不推荐使用肝素：肝素是一些酶的活性抑制剂，可能会对后续实验中用到的酶有抑制作用）。

3.样品处理不当的危害：血液存放过程中温度过高或反复冻融对细胞膜有很大的损害。温度过高及反复冻融会使细胞膜上的结构蛋白构象发生改变，进而造成细胞膜的弹性降低以致破解产生溶血现象，所以用于分离血清、血浆的血液应避免反复冻融。

4．血清、血浆中RNA含量如何确定？

依据前述步骤分离得到了血清、血浆，在用于高通量测序或芯片检测前，需要对其中含有的RNA含量进行鉴定，含量过低的样本在开展后续实验时会遇到检测不出来的情况，小编也请实验室里的专家来给大家分享分离血浆血清样本的窍门，总结了血清、血浆样本中RNA含量的评估技巧：

1.血清、血浆提取RNA后，采用nanodrop等基于紫外分光光度计测得的浓度，实际上是很不准确的，因为这些样品RNA含量过低，已经接近分光光度计的最低量程，而且相对杂质比较多，得到的数据往往会虚高。也就是说，用这种方式检测的结果是不可靠的。

2.实际上根据bioanalyzer2100 Pico RNA质检芯片的定量结果，一般1ml血清、血浆中提取得到的RNA总量大约的范围约为1-10ng。当然，也存在个体差异，且与样品的新鲜程度有很大的关系。

小知识：

1.由于血清、血浆样本中RNA含量较低，建议大家在条件允许的情况下，加大样本量，通过RNA富集最终可以达到下游实验所需用量 。

5.血清、血浆等微量样本用芯片还是测序检测比较合适？

检测这类样本中的长链RNA，如lncRNA、circRNA等，建议大家首选芯片，具体原因如下：

1. 微量样本不适合做核糖体RNA（rRNA）去除。在不去除rRNA时，如采用测序，则经过PCR扩增得到文库中绝大部分都是rRNA序列，lncRNA和circRNA序列占比很少；而芯片采用特异性探针检测，则不会受到rRNA的干扰；

2. 芯片实验采用线性序列扩增，不会出现测序文库扩增的序列偏好性；

3. 芯片对基因表达丰度无偏好，对低表达丰度的lncRNA也同样具有高灵敏度和准确性。测序则更容易检测到表达丰度高的编码基因，而不易检测低丰度的lncRNA；

4. 微量样本中，如果出现微量的外源性序列干扰，则测序文库扩增时会将其显著放大，干扰后期的数据分析；而芯片采用特异性探针检测，则不会受到此种干扰。

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今天的科普小课堂就到这里了

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