查看原文
其他

CAR-T细胞免疫基因疗法治疗HIV/AIDS面临的挑战及策略

金莹莹 细胞基因疗法 2022-12-21

HIV是人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus)的缩写,它通过破坏抵抗疾病和感染的重要免疫细胞削弱一个人的免疫系统。使用嵌合抗原受体改造的T细胞(CAR T)以加强T细胞对表达HIV病毒的细胞的靶向和杀伤能力,是目前一种强有力的HIV治疗方法。与天然的效应T细胞(CTL)相比,CAR T可以阻止或限制病毒的免疫逃逸,因为它们直接识别抗原,而不依赖于MHC的递呈。并且,CAR T细胞在体外生成后,可以在体外或在病人体内扩大几个数量级,这就提供了大量的抗原特异性细胞。理想情况下,CAR T细胞可以稳定并持久地监视贮藏的HIV病毒。
· CAR T细胞治疗简介
       嵌合抗原受体(CAR)包含三个结构域:一个细胞外结构域用于特异性结合抗原,一个跨膜部分用于固定受体,以及一个胞内结构域用于传递信号。其中,胞外结构域是一个来源于抗体或受体的可变区的单链片段变体(scFv)。胞内结构域通常是CD3ζ,是T细胞抗原受体的信号传导部分。利用这些特征,研究人员可以设计CAR来识别特定的抗原,并激活表达CAR的效应细胞。在临床实践中,研究人员可以从病人的血液中分离T细胞,建构CAR T细胞并进行扩增,然后再回输给病人。以HIV特异性CAR T治疗为例:先从HIV患者身上收集CD8+T细胞,再转入CAR基因;在体外验证了抗HIV的特异性和有效性后,将有功能的抗HIV特异性CAR T细胞重新注入病人体内,以杀死HIV感染的细胞。
· CAR T的发展历程 
       最早的关于抗HIV CAR的研究是将CD4胞外结构域(主要的HIV的细胞受体)与CD3ζ信号结构域融合(CD4ζ)。选择CD4作为 抗HIV CAR设计的优势在于,作为天然的HIV包膜识别分子,CD4确保了广泛的靶向性。此外,CD4在包膜蛋白上的结合位点是相对保守的。多项临床试验对该第一代基于CD4的CAR T细胞疗法在HIV患者中的效率和安全性进行了测试。试验表明,这种治疗并不能持久地控制病毒的复制;然而,这种治疗没有明显的毒性,而且改造后的T细胞可以在体内存活10年以上。缺乏病毒控制的原因可能有:(1)基于CD4的CAR使T细胞更易受HIV病毒感染,(2)缺乏共刺激信号,(3)T细胞扩增能力不理想,(4)缺乏病毒抗原的刺激。
       第二代CAR是在含有CD3ζ的第一代CAR的胞内尾部加入共刺激分子的结构域,如CD28或4-1BB。优化的包含了4-1BB结构域的抗HIV的第二代CAR-T细胞,其在体外抑制HIV复制的效力与只表达第一代CARs的T细胞相比至少高出50倍。动物研究表明,第二代CAR-T细胞与没有共刺激分子的CAR-T相比,在遇到抗原时能更快进行扩增,保护CD4+T细胞不受HIV感染。此外,类似的研究表明,4-1BB共刺激结构域在减少ART治疗后的病毒反弹和增加T细胞在没有抗原的情况下在体内的存在时间方面优于CD28结构域。
       第三代CAR是在第二代CAR中加入多种共刺激分子。第三代CAR T细胞已被开发出来,并且具有更强的效应功能、增殖和存活能力,最终增强对肿瘤的杀伤力。第三代抗gp120的CAR分子结合了多个细胞内信号域(CD3ζ-CD28-41BB),与CD4ζ-CAR相比,在体外裂解表达Env的细胞时显示出更大的效力。
      第四代CAR T细胞,又称为T细胞重定向为产生通用细胞因子介导的杀伤力 (TRUCKs),含有第三种刺激信号,可产生细胞因子,如IL-7、IL12、IL-15或IL-18,旨在改善CAR T细胞的扩增能力和延长其在体内的存在时间,目前正在研究其对实体肿瘤的靶向和杀伤能力。
· CAR T细胞治疗面临的挑战及相应策略
       根据抗HIV的CAR T细胞在体外的表现,该疗法在体内应该是有效的。然而,早期的临床试验显示,CAR T细胞疗法是安全的,但在体内的疗效甚微。此外,该治疗方法的临床转化还存在一些挑战和限制:
· 细胞扩增
       研究人员发现将修饰后的或者天然的HIV特异性的CTL输入到患者体内,这些细胞在很短的时间就会因发生免疫反应或细胞凋亡而死亡。而CAR T细胞回输体内也同样存在这种现象,这是研究者在将其运用到临床治疗时首要解决的问题。Sockolosky等人利用白细胞介素-2(IL-2),一种效应T细胞扩增、生存和发挥功能所需的细胞因子,来帮助CAR T细胞扩增。此后,研究人员还发现同时使用细胞因子IL-7和IL-15来培养CD19 CAR T细胞,能够促进naive和记忆细胞的产生和增殖。因此,与单独在IL-2中培养的CD19 CART 细胞相比,同时使用IL-7和IL-15在体内有更好的持久性和抗肿瘤疗效。另外,Fraietta等人用敲除甲基胞嘧啶二氧酶TET2 基因来改善CAR T细胞的扩增和疗效。他们观察到,在一个受试者中,94%的CAR T细胞中的TET2基因由于CAR基因的整合而破坏,推测这些细胞可能来源于同一细胞。还有一种在体内提高CAR T细胞功能和持久性的方法是阻断免疫检查点分子。通过CRISPR、shRNA或PD-1抗体阻断PD-1的策略已在癌症特异性CAR中实施,并观察到了良好的抗肿瘤效果。虽然PD-1阻断在HIV感染中能增强T细胞反应和抑制病毒血症,但内源性阻断PD-1或其他免疫检查点分子是否会促进体内的HIV特异性CAR T细胞反应还有待观察。
· 对HIV的易感性
         另一个挑战是CD4 CAR修饰的CD8+T细胞容易受到HIV感染,因为CD8+T细胞的细胞表面有丰富的CCR5共受体。为此,Kamata等人同时在细胞中表达两个shRNA,一个针对CCR5的表达,另一个针对HIV的LTR,以防止基于CD4受体的CAR T细胞感染HIV。他们的结果显示,随着时间的推移,表达shRNA的基于CD4受体的CAR T细胞的数量比没有表达shRNA的要高,这表明CAR CD8+T细胞对HIV感染的易感性可能是其存在短暂的部分原因。Liu等人通过添加17b人类单克隆抗体的单链可变片段,构建了一种新型的双特异性CD4-CAR,它可以识别gp120上高度保守的抗原表位。这种CD4-17b CAR显示出对HIV感染的抵抗力,比基于CD4受体的CAR具有更高的病毒抑制效力。
· 脱靶效应
       CAR可以被构建成专门针对HIV潜伏感染的细胞,以实现病毒的清除。然而,CAR也有可能攻击其他表达相同或类似目标抗原的健康细胞,这被称为脱靶效应。例如,由于CD19在正常和恶性B细胞上都有表达,使用基于CD19的CAR T细胞疗法治疗血液系统恶性肿瘤时,B细胞萎缩是不可避免的。幸运的是,没有数据表示在CD4-CAR试验中表达MHC II(CD4对应物)的细胞系会发生细胞溶解。因此,利用基于bNAb的CAR T疗法更加安全,因为这些bNAbs是专门针对HIV 包膜糖蛋白,而CD4在自然界可能有更多的同源物。然而,CAR在没有MHC I协助的情况下识别其特定抗原的能力引起了另一个问题,即它可能会识别可溶性抗原(如无细胞的或毒粒相关的HIV蛋白)并被激活然后释放细胞因子,对周围组织产生毒性,而不是专门针对被HIV感染的细胞。
· 严重的细胞因子释放综合征(sCRS)
       当CAR T细胞被注入到患者体内时,它们将通过与其特定抗原的相互作用而被激活。虽然它们可以特异性地攻击表达目标抗原的细胞,但也可能导致一个渐进的全身性炎症过程,即所谓的严重细胞因子释放综合征(sCRS)。其典型症状是高烧、低血压,甚至是器官衰竭。在输注CAR T细胞后,CRS通常在1-14天内发生,并持续2-3周的时间。IL-6是CRS的一个标志性细胞因子。CAR T细胞介导的癌症清除可能引发IL-6水平的升高。CRS期间IL-6的最重要来源是人类单核细胞。因此,屏蔽单核细胞或用tocilizumab阻断IL-6受体可以预防CRS。据报道,tocilizumab能迅速逆转CAR T疗法在一个重症儿童中诱发的sCRS。皮质类固醇在某些情况下也有助于控制CRS。然而,与tocilizumab相比,大剂量的皮质类固醇可能会影响CAR T细胞的抗肿瘤效果。
       总而言之,HIV的CAR T细胞疗法(特别是基于bNAb的CAR T)是治疗HIV感染的很有前景的方法之一,虽然目前面临着许多挑战,但值得科研人员进一步探索。

参考资料:

https://www.cdc.gov/hiv/basics/whatishiv.html
https://www.drugtargetreview.com/news/69860/novel-car-t-cell-therapy-could-help-cure-hiv/
Mu W, Carrillo MA, Kitchen SG. Engineering CAR T Cells to Target the HIV Reservoir. Front Cell Infect Microbiol. 2020 Aug 13;10:410. doi: 10.3389/fcimb.2020.00410. PMID: 32903563; PMCID: PMC7438537.

Qi J, Ding C, Jiang X, Gao Y. Advances in Developing CAR T-Cell Therapy for HIV Cure. Front Immunol. 2020 Mar 10;11:361. doi: 10.3389/fimmu.2020.00361. PMID: 32210965; PMCID: PMC7076163.


往期文章推荐:

2021年8月 基因治疗领域主要进展概览

FDA为基因疗法...会议,对其安全性保持谨慎乐观

基因编辑技术在血友病治疗中的应用

文献速递--眼科基因治疗领域几个可以关注的方向

基因治疗载体AAV与固有免疫应答

给基因治疗加上开关-聊一聊Xon系统的来龙去脉

国内首款B型血友病基因疗法BBM-H901获批临床

今年多地政府发文支持细胞治疗与基因治疗的发展

杭州嘉因生物启动SMA基因治疗产品临床试验

新一代的AAV载体---莫以衣壳论英雄

AAV衣壳改造的研究进展

机器学习设计新一代基因治疗载体,克服基因疗法主要挑战

数字PCR技术在细胞及基因治疗领域的应用概述

您可能也对以下帖子感兴趣

文章有问题?点此查看未经处理的缓存