在基于逆转录病毒的递送载体中,为提高病毒的宿主范围,表达水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)基因的序列已用于代替原病毒的env基因。除此之外,逆转录病毒载体中Ψ和 LTR序列分别是将基因包装到病毒体和整合到宿主所必须的。由于逆转录病毒颗粒缺乏刚性对称结构,通过将感兴趣的外源基因融合到 Gag 和 Pol基因的 N 端,已被证明可将外源基因掺入到病毒颗粒中,并在病毒颗粒成熟期间以蛋白酶依赖性方式从病毒多肽中释放出来(图三)。
1. VLP-mRNA
2021年蔡宇伽团队在Nature biomedical engineering 中报道了其自主研发的VLP-mRNA技术,该技术利用慢病毒包装和mRNA茎环结构与噬菌体衣壳蛋白特异识别等原理,可同时兼具病毒识别宿主广谱性及mRNA表达瞬时性等特点(图四)8。研究发现Cas9 mRNA通过VLP-mRNA递送,其体内存在时间约为72小时。因此,与长时间表达Cas9的病毒系统相比,VLP-mRNA可以显著降低脱靶效应。另外,VLP-mRNA可以递送整个CRISPR元件(Cas9与gRNA),克服了AAV载体运载能力小的限制。目前,VLP-mRNA已经在小鼠模型中证明可用于治疗疱疹性基质性角膜炎(HSK)。基于VLP-mRNA技术创建的本导基因公司,目前已针对包括病毒性角膜炎、地中海贫血和血友病在内的多种疾病进行临床前研究。
2.SEND
3. eVLP
4.小结
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E.N.D
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