SOP文件 | 脑脊液(CSF)检查操作规程及临床意义
目的：为脑炎、神经系统病变、蛛网膜下腔出血等疾病的诊断、治疗提供可靠依据。
标本采集：
脑脊液由临床医师进行腰椎穿刺采集，必要时可从小脑延脑池或侧脑室穿刺获得。穿刺后应由医师作压力测定，正常人脑脊液压力卧位为0.78～1.76kPa（80～180mmH2O）,儿童为0.4～1.0 kPa(40～100 mmH2O)。任何病变使脑组织体积或脑脊液量增加时，脑脊液压力均可升高，待压力测定后将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，第一管作细菌培养，第二管作化学分析和免疫学检查，第三管作一般性状及显微镜检查。每管收集1～3ml。脑脊液标本必须立即送验及时检查，放置过久将影响检验结果，如细胞破坏、变性，或细胞包裹于纤维蛋白凝块中，导致细胞数降低、分类不准确等。存放中的脑脊液葡萄糖会分解，使之含量降低；细菌自溶或死亡可影响细菌检出率等。
试剂：
3%磺柳酸溶液、5%石炭酸溶液、冰醋酸、1%盐酸、5mmol/L硝酸汞、0.1mol/L硝酸、二苯偶氮碳酰肼。
操作步骤：
一、常规检验：
1、颜色：分别为无色、黄色、红色、灰白色、乳白色报告。
2、透明度：分别以透明、稍浊、浊等报告。
3、蛋白定性（潘氏反应）：
操作：
（1）、取一小试管，加饱合石碳酸水溶液2ml。
（2）、滴加脑脊液1滴，立即观察反应结果。
（3）、结果判断如下：
阴性：仍清晰透明
弱阳：数分钟后显白色浊度不明显
+1：略显白色混浊
+2：显白色混浊无絮状沉淀
+3：显大量白絮状沉淀
+4：立即形成凝集
4、细胞计数：
（1）白细胞计数：
取脑脊液0.4ml置于冰醋酸洗过的试管中振荡混合10分钟滴入计数池内，计数。
直接法：
计数5个大方格内白细胞数×2
正常值：0～10×106/L
（2）红细胞计数：
将脑脊液混匀，直接注入计数池内数细胞计数，然后将细胞总数减去脑脊液的白细胞，即等于脑脊液的红细胞数。
计数一个大方格内的红细胞，再乘以10，即为每立方毫米的红细胞总数。必要时，也可以用红细胞稀释液或生理盐水稀释后进行计数。
正常值：一般无红细胞。
5、细胞分类：
超过20个/mm3以上分类
直接分类法：计数100个细胞中单核、多核各占百分比。
二、生化检验：
1、蛋白定量：
方法见生化“脑脊液与尿总蛋白（CSF）”检测
2、葡萄糖定量测定：
葡萄糖氧化酶法，见于生化血糖测定。
3、氯化物测定：
（1）方法：硝酸汞滴定法
（2）原理：用标准硝酸汞溶液滴定脑脊液中的氯离子。生成可溶性的难解离（不与二苯偶氮碳酰肼起反应）的氯化汞。当滴定到达终点时，过量的汞离子与汞批示剂—二苯基卡巴腙作用，生成淡紫红色的络合物，根据硝酸汞的消耗量，计算出氯化物浓度。
（3）试剂：
（a） 硝酸汞溶液（2.5mm/l）:称取硝酸汞[Hg(No3)2H2O]0.875g溶于含有浓硝酸3ml的去离水1L中，此溶液配制后，放置2天，经滴定标化后使用。
（b） 指示剂称取二苯偶氮碳酰肼0.1g，溶于100mL的95%乙醇中，置棕色瓶内，放冰箱内保存，可使用1个月。
（c）氯化物标准液：（100mmon/L）将氯化钠（AR）置110-120°C烘箱中干燥4h，取出置干燥器中至恒重，准确称取5.845g，置1L容量瓶中，以去离子水溶解并稀释至刻度。
（d）0.1mol/L硝酸。
(4)、操作：
在试管中加入脑脊液0.1ml，指示剂1滴，硝酸1滴，混合，用硝酸汞溶液以微量滴定管进行滴定，边滴边混匀，至出现不消褪的淡紫色为终点，记录硝酸汞溶液用量（ml）。在另一试管中加入氯化物标准液0.1ml，如标本一样滴定，记录硝酸汞溶液用量（ml）。
(5)、计算：
脑脊液氯化物(mmol/L)={滴定标本用去硝酸汞溶液量(ml)／滴定标准液用去硝酸汞溶液量（ml）}×100
注意事项：
1、试验所用器皿必须干净，滴定管固定专用，以保证结果准确一致。
2、脑脊液如混浊或含血液，应先离心后取上清液进行滴定。
3、每天在滴定标本的同时应与定值质控一起进行，以便于保证质量。
临床意义：
1、细胞分类：
（1）中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。
（2）中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主。
（3）细菌感染时（化脓性脑膜炎），细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。
（4）脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。
（5）脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。
2、蛋白定量：
脑脊液蛋白质含量增加，提示患者血脑屏障受到破坏，常见于脑、脊髓及脑膜的炎症、肿瘤、出血等以及脑软化、脑退化性疾病、神经病变和引起脑脊液循环梗阻的疾病等。当脑脊液中蛋白质在10g/L以上时，流出后呈黄色胶冻状凝固，而且还有蛋白-细胞分离现象，临床上称为Froin综合征，是蛛网膜下腔梗阻所致梗阻性脑脊液的特征。
3、氯化物测定：
正常脑脊液氯化物比血浆高，这是因为脑脊液要维持Donan平衡所致脑脊液中氯化物也随血浆氯化物的改变而变化。当脑脊液中蛋白质增多时，为维持脑脊液渗透压平衡，氯化物多减少，如化脓性脑膜炎，尤以结核性脑膜炎时最为明显。在低氯血症时（呕吐、脱水等）脑脊液氯化物也会减少。而病毒性脑炎时无显著变化。脑脊液中氯化物含量如低于85mmol/L时，有可能导致呼吸中枢仰制而出现呼吸停止，故如脑脊液中氯化物明显降低时应及时向临床医师通报，以便及早采取措施。脑脊液氯化物增加也可见于尿毒症患者。
4、葡萄糖测定：
脑脊液中葡萄糖和血糖有密切关系，脑脊液葡萄糖约为血糖的60%。也可以在30～90%范围内变化，这是由于血浆葡萄糖达到平衡需1～2h。糖尿病或注射葡萄糖液使血糖升高后脑脊液中葡萄糖也可以升高。当中枢神经系统受细菌或真菌感染时，这些病原体或被破坏的细胞都能释放出葡萄糖分解酶使葡萄糖被消耗，而使脑脊液中葡萄糖降低，尤以化脓性脑膜炎早期降低最为明显（<1.0mmol/L），甚至测定不出来。结核性、隐球菌性脑膜炎的脑脊液中葡萄糖降低多发生在中、晚期，且葡萄糖含量越低预后越差。病毒性脑炎时脑脊液中葡萄糖多为正常。