采集不同样本？RNA得率和起始量？你需要这份样本准备大全

样本的准备对于后续实验的进展，包括实验周期和质量的影响是至关重要的一步，同时也是一些新手比较关注的一点。比如：我要做多个不同的项目，样本需要准备多少量；我是医院样本该如何保证样本的质量；我要外出采样，样本该如何保存等等。别担心，我们都会给您答案。

01不同样本的RNA得率及各项目起始量

通常情况下RNA的得率：

正常组织 ＞癌症组织

幼嫩部位 ＞成熟组织

具体如下：

样本类型	样本量	Total RNA量
心脏 /肝脏 /脾脏 /肾脏/肺 /脑	100 mg	50 -100 μg
皮肤 /脂肪	100 mg	2 -10 μg
骨骼	100 mg	1-5 μg
花	100 mg	5 -10 μg
叶	100 mg	2 -10 μg
根 /茎 /果实 /种子	100 mg	1 -2 μg
常规培养细胞	1 ×106 cells	1 -2 μg
PBMC /流式分选细胞	1 ×106cells	1 μg

（仅供参考）

项目类型	Total RNA 推荐起始量	建议浓度
转录组	5 μg	≥50 ng /μl
miRNA测序（常规组织）	5 μg	≥120 ng /μl
miRNA测序（外泌体）	100 ng	-
lncRNA /circRNA测序	5 μg	≥200 ng /μl
基因表达谱芯片	100 ng	-
m6ARNA甲基化测序	200 μg	≥500 ng /μl
m6AlncRNA甲基化测序	50 μg	≥500 ng /μl
降解组（植物）	20 μg	≥400 ng /μl
降解组（动物）	200 μg	≥400 ng /μl

（仅供参考）

02几种常见样本的采集

1.动物组织

① 新鲜组织，分成绿豆粒大小

② 去除非研究的组织类型

③ 用预冷的RNase-Free 水或1 ×PBS洗净表面血渍和污渍，并吸干

④ 放入RNase-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管，液氮速冻1 h后，- 80 ℃保存

⑤ 整个过程要迅速，并且避免反复冻融

2.细胞

① 去除培养基

② 用1 ×PBS洗涤细胞，弃掉PBS，重复一次

③ 加入适量的Trizol裂解液反复吹打至充分裂解（液体不黏稠）

④ 转至RNase-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管，- 80 ℃保存

3.植物组织

① 新鲜、幼嫩组织

② 用预冷的RNase-Free 水或1 ×PBS洗净表面污渍，并吸干

③ 剪成合适的大小

④ 用锡箔纸包裹好，液氮速冻1 h后，- 80 ℃保存

⑤ 整个过程要迅速，并且避免反复冻融

4.细胞上清、体液

① 4 ℃，3000 g离心10 min，去除细胞及碎片

② 转管，4 ℃，13000 g离心2 min，去除残留的细胞及碎片

③ 转入RNase-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管，- 80 ℃保存

④ 以上操作请在样本收集后1 h内进行

5.全血

① 建议使用BD公司的PAXgeneTM采血管，- 80 ℃保存

② 其他类型的采血管或冻存管收集的血液，建议加入3倍体积的Trizol裂解液混匀，转入RNase-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管，- 80 ℃保存

③ 采血至提取RNA最长时间不得超过一周

6.血清血浆

① 血清建议使用真空采血管收集全血；血浆建议使用EDTA抗凝管收集全血

② 上下轻轻颠倒混匀十次后，4 ℃或冰上正立放置

③ 1200 g离心10 min

④ 转移上层液体至1.5 ml离心管，13000 g离心2 min

⑤ 将上清转入RNase-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管，液氮速冻1 h后，- 80 ℃保存

⑥ 不要寄送溶血现象严重的样本

7. 真菌细菌

所有致病菌需提前通知说明，并按照以下步骤处理（A、B液可向公司索要）

① 约30 mg样本加入400 μl溶液A，重悬

② 加入400 μl溶液B，60 ℃金属浴30 min

③ 70 %乙醇处理管子表面，- 80 ℃保存

非致病菌用RNase-Free 的带螺纹口的耐-192 ℃超低温冻存管保存，液氮速冻1 h后，- 80 ℃保存

03RNAlater的使用

如果没有条件，如缺乏液氮、干冰以及- 80 ℃冰箱等条件，可以用RNAlater或其他组织保存液保存样本，但仅限于动物组织样本。

① 将组织切成长宽高 ≤0.5 cm的大小

② 组织块完全浸入RNAlater中

③ 4 ℃保存过夜，-80 ℃保存

④ 干冰或生物冰袋运输

注意：

① 室温保存，如产生沉淀，37 ℃加热溶解后可继续使用

② 仅适用于新鲜可渗入的组织样本

③ 保存样本时，需4 ℃过夜后，再转到- 80 ℃，可长期保存

④ 没有冰箱时，可以先将保存于RNAlater的样本暂置于冰上

⑤ 取后剩余样本可放回RNAlater中

⑥ 液体样本、神经组织不要浸泡在RNAlater中

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