SOP文件 | 总胆汁酸(TBA)循环酶法操作规程及临床意义

应用仪器：全自动生化分析仪   

原理：

胆汁酸与3a-羟基类固醇脱氢酶（3a-HSDH）及氧化型b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）发生反应，生成3-酮类固醇以及还原型b-硫代烟酰胺脲嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。3-酮类固醇在3a-HSDH和Thio-NADH作用下，生成胆汁酸及Thio-NAD。通过循环酶而使微量的胆汁酸量得到放大。通过测定生成物Thio-NADH在405nm汲光度的变化，可测量样品中胆汁酸的浓度。

组成成分：

溶液A：

缓冲液（PH7.0）……………………65mmol/L

Thio-NAD……………………………1g/L

溶液B：

缓冲液（PH7.0）……………………65mmol/L

Thio-NADH…………………………6g/L

叠氮钠 ………………………………0.6mmol/L

3α-羟基类固醇脱氢酶………………≥5000U/L

标本：

1、用真空采样管采集所有血液标本。

2、离心前使标本完全自然形成凝块。

3、保持样品管的密闭状态。

4、抽血后2小时内完成离心和冷藏。

5、血清和血浆需用物理方法尽快与细胞分离。

6、去除所有可能存在的纤维蛋白和细胞成分，否则会得到假阳性结果。

7、如果48小时内不能完成检测即应将标本放入-20℃冰箱冻藏。

8、标本只能复溶一次，检测前须将复溶标本离心处理。不要用水浴方法复溶标本。

9、吸取血浆标本时应避免将红细胞层上的白细胞或血小板层吸出。

10、含有颗粒物质的浑浊血清或血浆标本在检测前须先从原始管内转运出来，并重新离心，原始管中含有分离介质（分离胶）的可以不再离心。

11、如果标本不在24小时内检测或运送标本时，将标本保存在-20℃或更低温度的环境中。

12、标本不能溶血。

工作液的配制：

双液体试剂直接使用。

操作参数：    

波长：405nm     比色杯光径：1cm

测量：相对于空气    反应温度：37℃

操作步骤：工作液和比色杯保温到37℃；实验期间温度应恒定在37℃±0.5℃

	微量
工作液	R1	270μl
R3	90μl
标本	4.0μl

样本+R1在37℃保温5分钟，加入试剂R3。样本+R1+R3在37℃保温60秒，记录吸光度值A1后，180秒后记录吸光度值A2。

线性范围：0～200umol/L

较准品：  本实验室采用罗氏公司生产的定值血清。

室内质控：本实验室采用省检验中心提供的质控血清

参考范围：0～20 umol/L

注意事项：

1、可根据需要适当调节样本加入量。

2、本血红蛋白<500mg/dl、抗坏血酸<100mg/dl、胆红素<50mg/dl，对实验结果不会有影响。

贮存条件与有效期：

原包装试剂储存在2℃～8℃至标签所示失效日期。

临床意义：

TBA是由肝脏分解代谢，能反映肝实质损伤。一旦肝细胞发生病变，血中胆汁酸浓度极易升高。急性肝炎、慢性活肝、肝硬化、肝癌TBA结果明显升高。与ALT进行比较，急生肝炎、慢性活肝两项都较敏感，但肝硬化、肝癌两种结果差异明显：TBA阳性率高达95%，而ALT阳性率仅为20%。因此，TBA测定用于监测慢性肝病价值很大，其测定方法简单，是一项很有实用价值的肝功能诊断指标。

胆内外胆道阻塞患者血清中胆汁酸盐，尤其胆酸盐浓度明显升高。在胆道阻塞时，血清中次级胆酸，如去氧胆酸盐和石胆酸盐常缺乏。肿瘤或结石引起的肝外胆道阻塞与药物引起的肝内胆汁淤积时，胆汁酸盐测定结果无明显差异。

急性病毒性肝炎血清胆汁酸盐常常明显升高，其升高时间与转氨酶基本一致，尤其是无黄疸型肝炎患者肝排泄功能障碍的最早表现。

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