来自一线销售的10×ATAC战地日记 | 10×ATAC专题

自10× ATAC技术推广，试剂盒上市后，当别家公司还在购买阶段，联川已经成为国内第一家正式接项目做10× ATAC测序的公司。在众多公司中脱颖而出，且积累了相当宝贵的10× ATAC取样经验。

看过官方的说明书，大家都知道10× ATAC测序取样与10×单细胞转录组测序取样是大不相同的，10×单细胞转录组样本只需要测活性、浓度、细胞总数合格的话，就可以立马取适量的细胞总数上10×仪器，并PCR扩增，中间不会有太多问题。而10×ATAC测序取样过程复杂且技术新颖，在之前没有任何的取样经验可言。作为国内第一家正式接项目做10× ATAC的测序公司，我们还是有些“秘籍”的。下面的内容来自一位一线销售的10× ATAC战地日记，一起看看需要注意哪些小细节、小技巧吧~

预约取样前，要先准备配置好wash Buffer , Lysis Buffer 保证新鲜现配。这个官方是没有现成的裂解液，只能老师或者公司根据官方提供的试剂清单现买现配。把细胞、组织等样本制备好悬浮液后，细胞记数算出细胞浓度、活性以及细胞总数得出的这些参数的合格率。过40μm的细胞筛过滤（细胞得率大约50%—80%不等）。

这个步骤需要注意一点，如果悬浮液细胞总数很多的话，不必过于在意这个过40μm细胞筛这一步骤，所有的悬浮液过滤后，经离心一般都是会得到很多40μm以下的细胞。再经裂解液裂解细胞膜，得到的细胞核数量也很可观。

如果本身悬浮液细胞总数不是很多，且过一个40μm的细胞筛，得到的细胞会很少，那么在官方操作书以下这一步离心的时候，就会出现一个很大的问题，在300rcf，4℃离心5min收集过膜后的细胞情况下，很有可能根本就看不到离心沉淀，看不到离心沉淀，实验者的心里就开始琢磨了，细胞到底离心下来了吗？如果离心下来了，那么应该会有沉淀，上清中就不会有大量细胞了；如果没有离心下来，没有沉淀那是正常的，那么上清中就会有大量的细胞。当然，按照官方提供的操作步骤肯定不会有太大问题，只是因为离心后没看到沉淀心里犯嘀咕。所以在这一步看不到沉淀情况下，可能存在的原因有：

第一：细胞量太少，离心后沉淀肉眼很难看见，因此看不到离心后的沉淀；

第二：离心机基本上都是40°的角度转头，离心下来后，沉淀未必就一定在管底，也可能在管壁，而因为量少，根本看不到沉淀；

第三：离心率太低，没有达到离心效果，这时候需要增加一点转速。（下图是离心后在找沉淀）。

之后加Lysis Buffer裂解细胞膜3-5min，裂解时间要把握好，时间短，可能裂解不彻底；时间长，可能裂解过了。在加Wash Buffer清洗离心这一步也是存在离心看不到沉淀，应当特别小心。Wash Buffer清洗之后，其他步骤基本上就没有太大问题了。

本文内容来自作者取样时的一些经历，仅代表个人观点，如有遗漏或者补充，欢迎大家提出。

若对此技术感兴趣，想与作者交流的，也欢迎留言给小编哦~

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