如何看待AAV 原材料和起始材料的质量保证
本文节选自对Sarepta基因治疗项目QA主管Biswarup DasGupta的专访。由于水平有限，详细内容，请参考原文。
您现在在做什么？目前，我正在过渡到一份新工作。在我的上一份工作中，我在罕见病基因治疗的质量职能部门工作。
目前 AAV（腺相关病毒）生产的原材料和起始材料面临哪些主要挑战？AAV 的关键起始材料在许多情况下是质粒和哺乳动物细胞库。对于质粒，第一个挑战是能够生产GMP质量级质粒的合格供应商的数量。其次，由于COVID-19，供应链总是充满挑战，当您没有后备供应商时，您就需要担心缺货情况。我对大家的建议是至少有一个后备供应商来避免这种情况。
哺乳动物细胞库是用于基因治疗 (GT) 生产的另一种关键原材料。您需要考虑在哪里制造主细胞库和工作细胞库，并根据国际人用药品技术要求协调委员会(ICH) 指南 (ICH Q5D) ，对其进行相应的限定。
最后，消耗率也可能是个问题。如果药物底物产量/收率低，那么您消耗关键原材料的频率就会更高。创建如此数量的细胞库并在使用前按时对其进行鉴定始终是一项挑战。
早期开发与后期开发以及商业化对质粒质量、鉴定和检测要求的监管期望的主要区别是什么？对于基因治疗产品，各个地区对质粒的监管指导有限。尽管在美国有一些指导，但欧盟提供了这方面的更多详细信息。欧洲那边的监管指南更深入一些，用于鉴定和检测质粒。目前，没有明确的监管指南或期望，但我们预期将有更多的指导方针。有些行业将质粒用作药物产品，无需进一步的生产处理，因此安全和质量属性需要比经过进一步处理的产品更加严格。由于基因治疗领域相对较新的进步，许多供应商因知识产权问题而不愿分享有关其工艺、材料和检测方法的信息。这使得与不愿对开发商保持透明的供应商共同解决产量和产品质量问题变得非常具有挑战性。随着基因治疗技术变得越来越普遍，这个问题可能会随着时间的推移而消退。与此同时，仔细检查合同，并坚持在签订合同之前，在合理的范围内与开发商/合作伙伴公司分享信息。因此，在未来几年，我们可以预期会有更大程度的监管监督和指南。
就早期和晚期开发而言，基因治疗领域的期望是拥有适合阶段的GMP。您需要针对预期目的定义质量。对于后期开发，您显然需要为您的生产过程提供更可靠且更合适的质粒。
您对基因治疗开发商有什么相应的建议？在早期阶段可能很难表征您的产品，因为您可能没有足够的数据。您应该用您拥有的任何东西来构建一个库，并且必须让那个数据生成机器继续运行。您需要测试您可以测试的任何批次，无论是中试规模、实验室规模还是生产规模，以便您有足够的数据可用于后期规格开发。在基因治疗中，人们有时会直接从1期进入3 期，跳过2期。最终，确保产品对患者安全的责任会落在制造商身上。对于每个阶段，安全性都是关键。
用于 AAV 基因治疗产品的质粒的正确分类（作为起始材料或中间体）和所需的 GMP 水平仍然不确定。未来，预期监管机构将提供更清晰的信息；但是，制造商应准备好根据他们在监管提交中描述质粒的方式来证明他们的质粒生产和放行控制策略的合理性。
在早期阶段，您应该选择要检查和表征的参数，这样您就可以放心地拥有可以继续使用的正确原材料或质粒。通过您的产品测试，您需要收集数据，以确保您在原材料阶段假设的任何内容在药物产品中仍然是正确的。
在后期，规格变得更加全面和详细。首先，制造商可以利用FDA 行业指南中建议的质粒检测方法，针对传染性疾病的质粒DNA 疫苗的注意事项。对于细胞库，ICH (Q5D) 有全面的指南。制造商应根据其来源和用途进一步表征细胞库和质粒的特性。我的建议是，在开发的后期，您需要非常了解您的质粒和细胞库。
您能告诉我们一些关于选择质粒骨架的关键考虑因素吗？质粒骨架包含复制起点和抗生素抗性基因等特征，这些特征对基因治疗药物产品的整体成功至关重要。制造商必须做出的重要决定之一是在质粒制造过程中用于细菌选择的抗生素抗性基因的类型。FDA建议制造商在生产人体治疗产品时应尽可能避免使用β-内酰胺类抗生素（如氨苄青霉素）。如果不可避免地使用β-内酰胺抗性基因，制造商应准备好证明在质粒制造过程中使用该抗生素是合理的。
您选择的质粒骨架取决于您的应用。这完全取决于您的表征工作以及您尝试制造的产品。无论您选择AMP 质粒还是 KAN 质粒，您都需要捍卫您的选择，以确保患者安全性以及产品稳定性。
在我过去的经历中，我没有看到任何由骨架引起的稳定性相关问题。我们在早期和后期使用了不同的骨架，并且有了两年多的稳定性数据，我们还没有看到任何与稳定性有关的东西。到目前为止，我们的质粒质量非常稳定。
在这方面，QA 的主要考虑是什么？制定规格有很多工作要做，而且必须从很早的阶段开始。您必须与您的开发团队密切合作，以了解和表征您的关键起始材料，如质粒和细胞库。一旦您锁定了规格，如果没有向监管机构提供重要的理由，就很难更改。
数据将推动这个规范，最终，它将定义QA 的立场。如果数据符合规格，我们 QA 会很高兴；如果不是，我们需要了解原因并调查原因。
最新的 AAV 原材料鉴定指南中的主要考虑因素是什么，尤其是那些具有显著批次间差异的原材料，例如培养基配方？考虑到批次间存在一定程度的差异，培养基可能是一个问题。在某些情况下，挑战来自供应商。供应商管理是接收优质材料的关键部分。与供应商签订强有力的质量协议(QA) 有助于确保产品质量始终如一。如果您不了解您的培养基或原材料供应商的质量管理体系，并且不要求他们通知您他们计划进行的更改，以评估变更对您的产品的影响，那么您可能永远不会明白为什么您突然开始看到产品质量的变化。原材料的微小变化可能会造成重大影响。
以血清为例，不同的因素会影响其质量，例如来自美国还是来自澳大利亚、奶牛的年龄以及奶牛吃什么。这些都是非常重要的事情要记住。在某些情况下，当供应商做出改变时，例如改变奶牛的饲料，最终会影响血清。
在这些情况下，制定有效的质量协议非常重要，以便供应商通知您所有变更，反过来，您可以通过变更控制系统评估变更并了解对产品的影响。在某些情况下，这些影响可能不会立即显现出来，但是，如果您认为变化很大，那么您需要开始随着时间的推移对数据进行趋势分析，看看是否需要采取额外的行动。一些公司在他们的PD 实验室中进行小规模研究，看看这种变化是否会对产品产生任何直接影响。如果您有能力，这是一个很好的做法。
这些质量考量是如何影响是否将质粒生产引入内部的决定的？在我看来，内部或外包质粒生产各有利弊。如果您还没有建立基础设施，那么引入内部生产绝非易事。一家小型初创公司可能没有足够的资金或技术来实现内部质粒生产。如果您决定将其引入内部，而您已经将其它供应商的质粒用于生产目的，则会产生工艺变更，需要进行可比性研究。一个重要的考虑因素是您是否有能力或资源来进行技术转移以及生产具有可比质量和安全性的产品。
也就是说，您可以在自己的控制范围内拥有的任何东西都变得更容易管理。但是，您必须构建基础设施，包括与此相关的、适应阶段的质量管理系统。此外，如果您在内部进行生产，您也会面临监管检查问题。
人们需要考虑什么最适合他们的业务以及业务的可持续性。在当前环境下，我们看到对质粒的高需求影响了全世界几乎所有的基因治疗产品。
您对与 AAV 原材料和起始材料相关的标准化举措有何看法？作为一个行业，我们有这个绝佳的机会，因为行业整体上还处于早期阶段。虽然很多事情都是保密的，涉及专利信息，但我认为如果有任何机制可以让我们在一个共同的平台上分享我们的知识并与监管机构进行公开讨论，那么共同进步的可能性很大。有一些论坛试图通过发布白皮书或寻求不同制造商的反馈来做到这一点。我们应该考虑酌情分享知识。这种方法开启了与监管机构的讨论，以确保协调一致。因此，我相信很快就会有一些新的指导方针或法规出台。
您如何看待不同监管管辖区在该领域的当前协调状态？在行业中，有一条路可走总是好的。当您尝试将多个供应商纳入一把伞下时，会遇到一些挑战。从行业的角度来看，如果监管机构齐心协力为基因治疗生产中使用的质粒提供统一的指导，明确特定阶段的适当要求，也会使供应商管理变得容易和一致。
原文：B.DasGupta, Troubleshooting quality assurance for AAV raw & starting materials. Cell & Gene Therapy Insights 2022; 8(2), 287–293.
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