NGL-Impact™ A ELISA 试剂盒性能总结

Protein A ELISA试剂盒，用于NGL-Impact™ A 配基

对于使用Praesto^® Jetted A50 捕获步骤的下游工艺，Repligen提供市面上唯一含有NGL-Impact™ A配基标准品的试剂盒，以进行最准确的定量。

• 准确匹配的Protein A 参考标准品（NGL-Impact™ A配基）

• 灵敏度0.1 ng/mL

• 回收率：80-120%

• 准确性 & 精确性：试剂盒间分析 +/- 10%，试剂盒内分析 +/- 15%

试剂盒包括：

• 抗-protein A 包被的96孔板

• 试剂A：样品稀释液（5X）

• 试剂B: NGL-Impact™ A 标准品溶液

• 试剂C：兔抗-protein A：生物素探针

• 试剂D：链霉亲和素：过氧化物酶偶联物

• 试剂E：TMB过氧化物酶底物

• PBS包（数量2）

简介

Repligen的NGL-Impact™ A ELISA试剂盒（产品编号 9222-1）旨在用于残留NGL-Impact™ Protein A的检测和定量，其为需要进行高灵敏度分析、以检测抗体产品中小量污染性NGL-Impact™ Protein A的用户而开发。NGL-Impact™ Protein A污染物的检测会在研发和商品化生产的多个不同阶段进行，可能包括：

• 工艺开发，特定条件下的填料脱落特性

• 生产，取自纯化工艺中多个点的洗脱样品

• 终产品出厂，记录工艺污染物水平和批次间一致性

以下总结报告包括在人免疫球蛋白G（hIgG）存在下，从NGL-Impact™ A ELISA试剂盒评估中获得的性能数据。这里提供的数据可证实：

• 使用Dilute & Go™（稀释 & 运行）方法在PBS-T缓冲液中存在达0.5mg/ml hIgG条件下，或使用Boil & Boost™（煮沸 & 增强）方法在样品中存在达10mg/ml hIgG条件下，检测NGL-Impact™ A的能力

• 回收率（准确性）、分析间和分析内精确性、定量限和检测限

结果总结

hIgG存在条件下的NGL-Impact™ A检测

评估了相比不含hIgG的标准品，Repligen的NGL-Impact™ A ELISA试剂盒在hIgG存在条件下检测NGL-Impact™ A的性能。NGL-Impact™ A加标样品稀释加入分析板时含有起始hIgG浓度0.5mg/ml，或使用煮沸方法时，含有10mg/ml hIgG起始浓度。每个加标样品制备重复3次，ELISA按试剂盒的标准方法进行。

数据处理

将标准曲线数据点拟合至线性回归线。该方程可用于反算样品NGL-Impact™ A浓度及计算LoQ值。回收率计算如下：

%回收率=（计算浓度/理论浓度）x100

分析内精确

表1. 分析内精确性，标准曲线样品（不含hIgG）

表2. 分析内精确性，含hIgG样品，使用Dilute & Go方法

表3. 分析内精确性，含hIgG样品，使用Boil & Boost方法

分析间精确性

表4. 分析间精确性，标准曲线样品（不含hIgG）

*浓度低于LLOQ

表5. 分析间精确性，含hIgG样品，使用Dilute & Go™方法

表 6. 分析间精确性，含hIgG样品，使用Boil & Boost™方法

准确性

表7. 标准曲线样品准确性

*浓度低于LLOQ

表8. 含hIgG样品准确性，使用Dilute & Go™方法

表9. 含hIgG样品准确性，使用Boil & Boost™方法

定量限值（LoQ）

根据无IgG存在的标准曲线确定的LoQ计算为0.07ng/ml。存在hIgG的NGL-Impact™ A加标样品的LoQ，在使用Dilute & Go™和Boil & Boost™方法时，分别为0.87ppm和0.048ppm。

检测限值（LoD）

根据标准曲线确定的LoD计算为0.06ng/ml。存在hIgG的NGL-Impact™ A加标样品的LoD，在使用Dilute & Go™和Boil & Boost™方法时，分别为0.64ppm和0.04ppm。

稀释线性

图1. 在含有IgG的整个检测浓度范围内，使用Dilute & Go™和Boil & Boost™方法，稀释线性均显示出准确性的高相关性。

结论

分析内数据显示，标准曲线样品的精确性在可接受参数范围内，%CV值范围为0.8-7.1%。分析内数据显示，样品分析相对准确且精确。

分析间数据显示数据具有可重复性。浓度等于或高于LoQ时，分析间变异系数低于或等于7.2%。样品分析间精确性范围为2.4-7.5%。

高于LoQ的浓度的准确性，以%相对误差计量，标准品为-10.6-14.2，使用Dilute & Go方法和Boil & Boost™方法分析的样品为-5.6-15.1。

根据不含IgG的标准曲线确定的LoQ计算为0.07ng/ml。含有hIgG的NGL-Impact™ A加标样品的LoQ，使用Dilute & Go™和Boil & Boost™方法时，分别为0.87ppm和0.048ppm。

根据标准曲线确定的LoD计算为0.06ng/ml。含有hIgG的NGL-Impact™ A加标样品的LoD，使用Dilute & Go™和Boil & Boost方™法时，分别为0.64ppm和0.04ppm。

所有等于或高于LoQ的样品浓度的%CV值为1.0-3.5%，低于15%的限值。

计算说明

精确性（%CV）

精确性的计算方法是确定NGL-Impact™ A加标样品数据点之间的标准偏差，并除以平均值。根据“行业指南：生物分析方法验证”内容，%CV应在15%以内。

分析内精确性

通过对所有分析的%CV值进行平均，计算每个NGL-Impact™ A加标样品浓度的分析内精确性。

分析间精确性

通过确定每三个分析计算结果的标准偏差，并除以平均值，计算每个浓度点的分析间精确性。

定量限值（LoQ）

定量限值（LoQ）定义为0ng/ml样品的标准偏差的10倍。0ng/ml OD值的标准偏差乘以10，然后与基数0ng/ml OD值相加。再将求和值输入线性方程生成LoQ。对于每个试剂盒，LoQ以ng NGL-Impact™ A每ml（ng/ml）缓冲液为单位报告，在含有hIgG条件下，运行NGL-Impact™ A加标样品时，以ng NGL-Impact™ A 每mg hIgG（ppm）为单位报告。

检测限值（LoD）

检测限值（LoD）定义为0ng/ml Protein A样品的标准偏差的3倍。0ng/ml OD值的标准偏差乘以3，然后与基数0ng/ml OD值相加。再将求和值输入标准曲线公式生成LoD。对于每个试剂盒，LoD以ng NGL-Impact™ A每ml（ng/ml）缓冲液为单位报告，作为部分时报告单位为每百万（ppm）IgG浓度。

准确性

准确性描述为相对理论加标浓度，分析确定的回收率%。

标准曲线示例

我们同时提供：

PROTEIN A ELISA试剂盒，用于MabSelect SuRe™ 配基

对于使用MabSelect SuRe^™ 捕获步骤的下游工艺，Repligen提供市面上唯一含有SuRe^™配基标准品的试剂盒（产品编号：9333-1），以进行最准确的定量。

• 准确匹配的Protein A 参考标准品（SuRe™配基）

• 灵敏度0.1 ng/mL

• 回收率：80-120%

• 准确性 & 精确性：试剂盒间分析 +/- 10%，试剂盒内分析 +/- 15%

MabSelect™、MabSelect SuRe™和SuRe™为GE Healthcare注册商标。

Praesto®为Purolite Life Science注册商标。

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