最新透析应用集锦（十八）

承接前几期内容，本期继续介绍几篇典型透析应用文章。

1

来自韩国中央大学的科学家们在2018年《Journal of Pharmaceutical Investigation》杂志上发表了题为“Steric stabilization of RIPL peptide-conjugated liposomes and in vitro assessment”的文章。文中，使用透析方法研究多西他赛（DTX）从不同脂质制剂溶出的体外溶出特性。操作时，将载DTX的脂质体加入MWCO 50kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置内，随后装置完全浸没于作为溶出介质的含0.5% SDS的PBS溶液中，在预定的时间点，从溶出介质中取样进行HPLC分析。

摘要：使用聚乙二醇（PEG）对RIPL多肽偶联的脂质体（PEG-RIPL-L）进行空间性稳定，以防止被单核巨噬系统（MPS）识别，并延长其在体内的系统循环。通过薄膜水化法制备了PEG修饰的马来酰亚胺衍生脂质体，并通过巯基-马来酰亚胺反应偶联RIPL多肽。为优化体系，使用不同链长度的PEG制备PEG-RIPL-L。PEG-RIPL-L为带正电荷的纳米分散液，并通过预载入成功包封了多西他赛（DTX），包封率和载药量分别为31-35%和15-20 μg/mg。DTX的溶出特性显示为双相模式，即开始6小时快速溶出，随后为达72小时的持续溶出。此外，相比5 mol% PEG2000-嫁接的RIPL-L（PEG2K-RIPL-L），5 mol% PEG3000-嫁接的RIPL-L（PEG3K-RIPL-L）显示出增强的抗吸附能力。使用荧光探针（FITC-dextran）的共聚焦显微镜和流式细胞术证实PEG3K-RIPL-L具有最强的隐形效果。进一步的细胞摄入分析显示，PEG3K-RIPL-L维持靶向选择性细胞内递送能力。细胞毒性分析显示，相比DTX-Sol，PEG3K-RIPL-L的IC50值低1.8倍。通过PEG3K的表面修饰，成功实现了RIPL-L的空间化稳定，PEK3K-RIPL-L具有在血液循环中用作靶向药物递送纳米载体的潜力。

原文：M.H.Jang, C.H.Kim, H.Y.Yoon, et al., Steric stabilization of RIPL peptide-conjugated liposomes and in vitro assessment. Journal of Pharmaceutical Investigation, 2018, https://doi.org/10.1007/s40005-018-0392-6.

2

来自西班牙巴斯克国家大学等的科学家们在2019年第655期的《Science of the Total Environment》杂志上发表了题为“Dietary exposure of mussels to PVP/PEI coated Ag nanoparticles causes Ag accumulation in adults and abnormal embryo development in their offspring”的文章。文中，研究PVP/PEI 包被的Ag NP在海水或BME培养基中的溶解性时，将10mg/L的Ag NP悬液置于MWCO 0.1-0.5 kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置内，再浸没于1L海水或BME中，12和24h时取样，稀释100倍后，以ICP-MS法分析Ag离子。

摘要：银纳米颗粒（Ag NP）对水生生物的毒性已被广泛研究。但是，通过食物网摄取的Ag NP的潜在毒性作用以及对后代的潜在影响尚未知，特别是环境相关浓度条件下。本文的目的是筛选体外聚乙烯吡咯烷酮/聚乙烯亚胺（PVP/PEI）包被的5nm Ag NP对红细胞的细胞毒性作用，并评估膳食暴露于Ag NP对贻贝生长、免疫状态、性腺状态、生殖成功以及后代胚胎发育的影响。为此，贻贝Mytilus alloprovincialis每日喂食已暴露于环境相关浓度等剂量（1μg Ag/L Ag NP）或高剂量10 μg Ag/L Ag NP 24小时的微藻Isochrysis galbana。体外暴露24小时后，从1mg Ag/L 开始，Ag NP对贻贝血细胞有细胞毒性（LC50:2.05 mg Ag/L）。暴露于两种剂量后，微藻显著累积Ag，贻贝喂食暴露于10μg Ag/L Ag NP的微藻21天后，其消化腺和鳃中显著累积Ag。精子运动和受精成功未受影响，但与未暴露雌性相比，暴露后雌性产卵减少。父母暴露于两种剂量后，异常胚胎的比例显著高于对照组个体。总体来说，结果表明，通过饮食摄取的Ag NP会显著影响生态相关终点，如海洋贻贝的繁殖成功率和胚胎发育。

原文：N.Duroudier, A.Katsumiti, M.Mikolaczyk, at al., Dietary exposure of mussels to PVP/PEI coated Ag nanoparticles causes Ag accumulation in adults and abnormal embryo development in their offspring. Science of the Total Environment, 2019, 655: 48–60.

3

来自盐城工学院的科学家在2018年的《Analytical Methods》上发表了题为“BSA templated cerium/gold nanoclusters as pH and ROS dual sensors”的文章。文中，为对合成的牛血清白蛋白-铈/金纳米簇（BSA-Ce/Au NC）进行纯化，将制备的溶液加入MWCO 20kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2即用型透析装置内，并置于磷酸盐缓冲液内透析2天。

摘要：牛血清白蛋白（BSA）模板化金纳米簇（NC）（BSA-Au NC）是一种有趣的传感材料。与BSA-Au NC不同的是，BSA模板化铈/金纳米簇（BSA-Ce/Au NC）有两个以410和680nm为中心的放射谱带。通过控制Ce(IV)/Au(III)和BSA浓度的摩尔比，可以很容易地调节BSA-Ce/Au NC的光学特性。由于两个谱带对于pH值和活性氧（ROS）水平的变化具有独立的敏感性，所以BSA-Ce/Au NC被用作确定pH值和对ROS进行定量的探针。从灵敏性和稳定性考虑，使用1 mM Ce(IV)、5 mM Au(III)以及35 mg/mL BSA制备的BSA-Ce/Au NC最佳。在pH 7.0时，制备的BSA-Ce/Au NC对过氧化氢和次氯酸钠的检测限分别为0.8和3.2 μM。鉴于BSA-Ce/Au NC的光特性对pH和ROS浓度的依赖性，构建了蕴含门（IMP）和非逻辑门。生物相容性BSA-Ce/Au NC可允许记录HepG2细胞成像，显示H2O2诱导的ROS水平的变化，而细胞内pH值变化不显著。

原文：J.Cang, BSA templated cerium/gold nanoclusters as pH and ROS dual sensors. Analytical Methods, 2018, DOI: 10.1039/c8ay02527d.

4

来自法国蒙特利埃大学等的科学家们在2018年9月的《Journal of Colloid and Interface Science》杂志上发表了题为“Reversibly core-crosslinked PEG-P(HPMA) micelles: Platinum coordination chemistry for competitive-ligand-regulated drug delivery”的文章。文中，在研究姜黄素从胶束中体外溶出时，使用了MWCO 3.5 kD的Spectra/Por Float-A-Lyzer G2 即用型透析装置。

摘要：假设：聚(乙二醇)-聚(N(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺)(PEG-P(HPMA))嵌段共聚物上存在的悬垂型硫醚基团可实现铂介导的胶束核配位交联，从而促进胶束稳定性以及刺激反应性药物递送。实验：使用一种基于PEG的大分子引发剂，通过一种新型HPMA-MTB单体的自由径向聚合作用，合成了一种含有垂悬型4-(甲硫基)苯甲酰(MTB)基团及P(HPMA)嵌段的、基于PEG-P(HPMA)的新型嵌段共聚物。使用金属-有机物连接剂[亚乙基二氨铂(II)]2+作为交联剂，下称为Lx，其是一种配位连接分子，已被用于将药物分子偶联至多种合成的或天然的载体系统，如超支化聚合物和抗体。发现：在胶束核内引入Lx后，由于中央铂原子和不同聚合物链上的硫醚基团之间的配位结合，导致胶束粒径变小，临界胶束浓度降低，疏水性药物姜黄素的保留率提高。在模拟细胞外环境条件下，由于竞争性配位以及随后的胶束解交联，药物从Lx交联的胶束中溶出的速度显著增加。核交联Lx PEG-P(HPMA)胶束具有制备简单以及有利于药物溶出的特点，有望成为一种通用的纳米药物平台。

原文：S.Buwalda, B.Nottelet, A.Bethry, et al., Reversibly core-crosslinked PEG-P(HPMA) micelles: Platinum coordination chemistry for competitive-ligand-regulated drug delivery. Journal of Colloid and Interface Science. 2018, DOI: https://doi.org/10.1016/j.jcis.2018.10.001

文章摘要为编者翻译，由于水平有限，如有不当之处，敬请谅解，详细内容，请参考原文。

---

更多阅读

---

动态透析

动态透析是一种令人振奋的新技术，其通过动态液流，来提高纯化效率，并优化大体积缓冲液的操作，是不稳定蛋白质、粘稠液体和聚合物凝胶（如透明质酸）纯化的理想选择。这种封闭式的高效系统可实现高浓度梯度的透析，而无需手动更换缓冲液以及过程中取样操作。

传统透析工作原理

动态透析工作原理

实验室规模动态透析

将Spectra/Por Tube-A-Lyzer安装至 KrosFlo Research I 泵系统的支架上，即可进行动态透析操作，适用于8-30 ml小体积精细样品的透析处理。系统可以单个单元操作，或使用连接托架，组合安装多个单元，形成多单元设备而平行操作。

工艺规模动态透析

在工艺规模下，动态透析可用于大分子、蛋白质、纳米颗粒、生物分子、聚合物（多肽、多糖、寡核苷酸）、用作疫苗的病毒以及精细/剪切敏感性物质的纯化。动态透析也是不能过滤的粘稠液体和水凝胶（透明质酸 - HA）纯化的理想选择。

透析膜

Repligen提供的透析膜包括生物技术级、标准级和定制化膜，可用于实验室规模和工艺规模操作。