【动植物检疫】海关技术规范解读 | 梨波氏盘菌果腐病菌检疫鉴定方法（SN/T 5467-2022）

2022年7月7日，中华人民共和国海关总署发布了2022年第57号公告（关于发布《进境种用雏禽指定隔离检疫场建设规范》等90项行业标准的公告），其中《梨波氏盘菌果腐病菌检疫鉴定方法》SN/T 5467-2022自2023年2月1日起实施，本文对该行业标准进行解读。

一、什么是梨波氏盘菌果腐病菌？

梨波氏盘菌果腐病菌Potebniamyces pyri是一种危害苹果、梨等植物的病原菌，除了引起果树树皮的溃疡或坏死外，还可以引起储藏期梨果的腐烂病，据美国提供材料，该有害生物是美国梨上新发现的收获后有害生物。该病目前分布于德国、英国、乌克兰、俄罗斯、塞浦路斯、加拿大、美国的俄勒冈州和华盛顿州等地，中国无分布，在美国华盛顿州发生最为严重，给当地梨的生产带来了严重的经济损失。2004年，Xiao等人对华盛顿州d'Anjou梨储藏期病害的调查结果表明，梨波氏盘菌腐烂病是梨果储藏期腐烂病的重要组成部分，大约有30%的梨腐烂病是由P. pyri引起的。该菌一旦传入我国，将给我国的梨产业带来严重影响。本实验室在2013年首批进境的美国梨中分离到该病菌，但由于其与其他弱寄生菌复合侵染的特性，经历了长时间的分离纯化培养，才鉴定出该病菌。亦由于它的复合侵染特性，在检疫过程中非常容易被忽略，发生漏检的现象，因此研发其相应的检测方法或通过查阅已报道文献进行方法验证，以形成梨波氏盘菌果腐病菌的检测的推荐性方法，并形成包括分离培养、检测技术、基本信息介绍在内的《梨波氏盘菌果腐病菌检疫鉴定方法》的行业标准，对于我国口岸对于该病菌的检疫工作具有重大意义。

梨波氏盘菌果腐病菌危害树干（引自P.L.SHOLBERG，2010）

二、该标准的适用范围：

本标准规定了梨波氏盘菌果腐病菌的检疫鉴定方法。本标准适用于进境鲜梨、苹果及相关寄主植物产品携带的梨波氏盘菌果腐病菌的检疫鉴定。

三、如何检测梨波氏盘菌果腐病菌？

1.症状观察：仔细检查果蒂、果萼及果实表面是否有腐烂病斑、菌丝、分生孢子器等。

梨波氏盘菌果腐病菌表面症状图

2.病菌的分离、纯化及形态观察：果实样品，采用进行 75 % 酒精表面擦拭消毒，快速过火，切开去表皮，在病健交界处取样，切成 4 × 4 mm 小块。置于 PDA 平板上，20 ℃ 条件下 20 d 后进行分生孢子器观察。

梨波氏盘菌果腐病菌培养性状及孢子形态

3.PCR 检测：采用引物 ITS1/ITS4 可扩增出约 550 bp的特异性条带，Bt-LEV-Up4 / Bt-LEV-Lo1 扩增后可得到 664 bp的条带，将条带回收测序，进行 Blast 比对，应与Potebniamyces pyri的序列同源性达 99 % 以上。

梨波氏盘菌果腐病菌DNAITS1/ ITS4扩增产物测序片段系统发育树

梨波氏盘菌果腐病菌DNABt-LEV-Up4/ Bt-LEV-Lo1扩增产物测序后系统发育树

四、该标准的特点：

1. 方便、快速，操作简便

本标准建立了梨波氏盘菌果腐病菌的分离培养方法和分子生物学检测方法，是典型的传统形态学鉴定与分子生物学鉴定相结合的病原真菌鉴定方式，通过方法的建立，可指导口岸一线人员快速对疑似目标物进行定性，大大缩短了无标准方法时的大量摸索工作。

2. 广泛适用性

该方法所涉及的检测方法及设备均为口岸实验室常规设备，操作简便、快捷，技术难度不高，且可同批次处理大量样品。为口岸实验室在进境植物产品中的检测工作提供了便捷。

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供稿单位：综合业务司、大连海关