活体动物脱靶检测—GUIDE-tag

    CRISPR/Cas9应用于活体动物中主要面临两大问题：其一是存在脱靶效应，严重影响了其临床应用；其二是sgRNA设计软件种类繁多，软件设计出的sgRNA需进一步实验筛选，投入了大量的资金成本与时间成本。

基于此，珠海舒桐针对活体动物提供了一种基于链霉亲和素-生物素系统的脱靶检测方法—GUIDE-tag，此方法打破了普通方法dsODN整合效率低下的问题，是一种敏感性更高、特异性更好，并可同时检测切割效率和脱靶效应的有效sgRNA筛选方法。GUIDE-tag是基因编辑应用于活体动物研究、临床研究中不可或缺的脱靶检测方法，也是广大科研人员进行sgRNA筛选的利器。

撰文｜Ruirong Li

责编｜Xiaoying Yu

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GUIDE-tag实验原理

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图1 GUIDE-tag实验原理【1】

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GUIDE-tag实验流程

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图2 GUIDE-tag实验流程【1】

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GUIDE-tag服务优势

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1、通过静脉注射进在活体内（小鼠、猪），切割效率和脱靶效应更加符合实际；

2、更高的敏感性，脱靶检测更全面，能检测到编辑率为≥0.2%的脱靶位点；

3、特异性高，假阳性率降低；

4、相较于GUIDE-pro，不受细胞转染效率的影响，切割效率更高；

5、更高的性价比：常用于基因编辑实验中有效sgRNA的筛选，同时获得不同sgRNA的在靶和脱靶数据，为后续实验提供有效支撑，大大降低后续实验及时间成本。

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GUIDE-tag服务内容

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服务项目	内容	周期	价格	交付形式
GUIDE-tag	RNP的制备+建库+测序+分析	1-3个月	欢迎垂询	sgRNA+原始数据+可视化结题报告

*高级服务内容：根据项目/课题的需求可定制个性化分析，具体可与舒桐平台联系。

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送样要求

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1、若我司进行动物实验，可提供Cas9-mSA蛋白及sgRNA；

2、若客户进行动物实验，则需要提供目标组织DNA≥ 25µg，浓度≥ 50ng/µl，OD260/280=1.8~2.0，检测无降解；

3、建库前确保DNA样品有biotin-dsDNA插入，可由我司进行检测；

4、若需我公司完成一体化服务，可与舒桐平台联系。

iGUIDE & bio-iGUIDE donor

比较iGUIDE & bio-iGUIDE donor以验证GUIDE-tag的效率。通过检测相同位点在相同数据量条件下的脱靶，结果显示：GUIDE-tag可以找到更多的脱靶位点，大大的提高了脱靶检测的敏感性和特异性。

图3通过 iGUIDE & bio-iGUIDE donor验证GUIDE-tag的效率的比较【1】

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参考文献：

【1】Liang, S. Q. et al. Genome-wide detection of CRISPR editing in vivo using GUIDE-tag. Nat Commun 13, 437, doi:10.1038/s41467-022-28135-9 (2022).

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