MabSelect SuRe™ ELISA试剂盒性能总结

1. 简介

Protein A ELISA试剂盒（产品编号：9333-1）旨在对残留的MabSelect SuRe^™配基进行检测和定量。我们的ELISA检测试剂盒专门为需要进行高灵敏度分析的客户而开发，以检测抗体产品中残留的小量污染性MabSelect SuRe^™配基。对此类污染物的检测会在工艺开发和商品化生产的不同阶段进行，可能包括：

• 在工艺开发阶段，针对在特定条件下，填料析出特性的鉴定

• 在生产阶段，针对在纯化过程中的多个不同节点所取洗脱样品的检测

• 终产物出厂前，文件记录工艺污染物水平及批次间一致性

以下总结报告包括在人免疫球蛋白G（hIgG）存在条件下，从Protein AELISA 试剂盒评估实验所获得的性能数据。数据证实Protein A ELISA 试剂盒：

• 在以PBS-T为缓冲液，且存在高达0.5 mg/ml hIgG的条件下，有能力检测MabSelect SuRe^™配基

• 回收率（准确性）、分析间和分析内精确性、定量限值和检测限值

2. 结果总结

hIgG存在条件下的MabSelect SuRe^™检测

在hIgG存在条件下，对MabSelect SuRe^™配基进行检测，并与不含hIgG的标准品条件进行比较，以评估Protein A ELISA试剂盒的性能。加标样品含有hIgG终浓度为0.125mg/ml（最终稀释至分析板后）。每个样品制备8个重复，并按试剂盒标准步骤，进行三次独立的ELISA实验。

数据处理

标准曲线数据点拟合至4-参数拟合分析。使用公式可反算样品rPA浓度并计算LoQ值。回收率可按如下公式计算：

分析内精确性

表1. 标准曲线样品的分析内精确性

表2. 含有hIgG样品的分析内精确性

分析间精确性

表3. 标准曲线样品的分析间精确性

表4. 含有hIgG样品的分析间精确性

准确性

表5. 标准曲线样品的准确性

表6. 含有hIgG样品的准确性

定量限值（LoQ）

根据标准曲线确定的LoQ计算为0.025ng/ml。含有hIgG的MabSelect SuRe^™配基加标样品的LoQ为0.115ng/ml或0.920ng/mg（0.92ppm）。基于此数据，设定试剂盒在免疫球蛋白存在条件下（＜1ppm）检测MabSelect SuRe^™配基的灵敏度。

稀释线性

图1. 稀释线性图显示，在检测的MabSelect SuRe^™配基浓度范围内，具有高准确性相关性。

结论

分析内数据显示，三次分析的精确性在可接受参数范围内，标准品的%CV值范围为2.3-7.5%。本实验设置的标准LoQ为0.025ng/ml。

分析间数据显示，针对含有hIgG的样品的分析具有相对的准确性和精确性，%CV值范围为11.0-4.1%。针对样品的LoQ计算为0.115ng/ml。准确性，以%相对误差进行标量，标准品为7.3 - -1.3，样品为-8.8 – 5.9。

分析间数据显示相似的结果。在所有浓度条件下，标准曲线样品之间的%CV低于2.7，证实了三次分析间的精确性。对于浓度高于LoQ的、含有hIgG的样品，检测具有高度精确性，%CV值范围为13.0-0.9%。

3. 计算说明

精确性（%CV）

精确性的计算方法是确定rPA加标样品数据点之间的标准偏差，并除以平均值。根据“行业指南：生物分析方法验证”内容，精确性应在15%以内。

分析内精确性

通过对所有分析的%CV值进行平均，以计算每个rPA加标样品浓度的分析内精确性。

分析间精确性

通过确定每三个分析计算结果的标准偏差，并除以平均值，以计算每个浓度点的分析间精确性。

定量限值（LoQ）

定量限值（LoQ）定义为0ng/ml样品的标准偏差的10倍。0ng/ml OD值的标准偏差乘以10，然后与基数0ng/ml OD值相加。再将求和值输入标准曲线4-参数拟合公式，生成LoQ。对于每个试剂盒，LoQ以ng Protein A每ml（ng/ml）缓冲液为单位报告，在含有hIgG条件下，运行rPA加标样品时，以ng Protein A 每mg hIgG（ppm）为单位报告。

检测限值（LoD）

检测限值（LoD）定义为0ng/ml Protein A样品的标准偏差的3倍。0ng/ml OD值的标准偏差乘以3，然后与基数0ng/ml OD值相加。再将求和值输入标准曲线4-参数拟合公式，生成LoD。对于每个试剂盒，LoD以ng Protein A每ml（ng/ml）缓冲液和百万分比浓度（ppm）为单位报告。

准确性

准确性描述为相对理论加标浓度，分析确定的回收率%。

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PROTEIN A ELISA试剂盒，用于MabSelect SuRe™ 配基

对于使用MabSelect SuRe^™捕获步骤的下游工艺，Repligen提供市面上唯一含有SuRe^™配基标准品的试剂盒，以进行最准确的定量。

• 准确匹配的Protein A 参考标准品（SuRe™配基）

• 灵敏度：0.1 ng/mL

• 回收率：80-120%

• 准确性 & 精确性：试剂盒间分析 +/- 10%，试剂盒内分析 +/- 15%

试剂盒包括：

• 抗-protein A 包被的96孔板

• 试剂A：样品稀释液（5X）

• 试剂B：MabSelect SuRe^™标准品溶液

• 试剂C：兔抗-protein A：生物素探针

• 试剂D：链霉亲和素：过氧化物酶偶联物

• 试剂E：TMB过氧化物酶底物

• PBS包（数量2）

产品编号：9333-1，Elisa Kit PZ (SuRe)

MabSelectSuRe^TM为GE Healthcare注册商标。

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