ASH 2020 | 陆道培医院11项研究成果入选墙报展示
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美国血液学会（ASH）年会以“助力全球血液学家克服血液疾病”为使命，会上，来自全球血液学领域的专家学者，提供宝贵的临床经验，相互交流，探索血液病最新研究进展以及治疗方案，以期为血液病患者提供更有效的医疗服务。ASH年会每年接收超过5000份学术报告，经过严格的筛选审查，入选的口头报告和墙报摘要代表血液学领域最高水平，登上国际学术舞台。
作为中国乃至亚太地区享誉盛名的造血干细胞移植和细胞治疗中心之一，每年的ASH年会上都能看到陆道培医学团队的身影，在造血干细胞移植、CAR-T细胞治疗以及医学检验方面每年都有最新的研究成果呈现。尤其在精准检验方面，陆道培检验医学团队用精准MICM检测为临床诊疗提供支持，同时不断分析和总结，在血液病病理和医学检测方面的研究，硕果累累。
墙报摘要 1&2
第一作者：陈雪，通讯作者：刘红星，陆道培医院；摘要号：1083
“Fusion Gene Map of AML Revealed By RNA-Seq of a Consecutive Cohort of 400 Cases in a Single Center”
（基于单中心400例急性髓系白血病患者的转录组测序结果描绘的急性髓系白血病融合基因图谱）
第一作者：陈雪，通讯作者：刘红星，陆道培医院；摘要号：2915
“Fusion Gene Map of ALL Revealed By RNA-Seq of a Consecutive Cohort of 350 Cases in a Single Center”
（基于单中心350例急性淋巴细胞白血病患者的转录组测序结果描绘的急性淋巴细胞白血病融合基因图谱）
两篇摘要分别展示了我院基于400例AML患者和350例ALL患者的转录组测序结果绘制的AML和ALL的融合基因图谱。转录组测序提供了分析融合基因的通用和有效方法，不仅可以分析已知的融合基因，更对未知的少见型和变异型融合基因的鉴定有独特优势。
通过转录组测序发现急性白血病中真实存在的融合基因图谱与预想的不同，更鉴定出多种以往未见报道的对临床诊断、用药指导和MRD监测有明确意义的融合基因。融合基因家族概念的提出则可以帮助我们对融合基因进行归类和理解其病理意义，从而更加正确的认识和归纳不断被鉴定的新融合。
墙报摘要 3第一作者：张广思，通讯作者：刘红星，陆道培医院；摘要号：1099
“Classification and Quantification of Oncogenic Ikaros Isoforms in B Cell Precursor Acute Lymphoblastic Leukemia By RNA-Seq”
（基于转录组测序的急性B淋巴细胞白血病IKZF1转录本分型和定量分析）
急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)是儿童最常见的一类恶性肿瘤。尽管儿童B-ALL的治愈率已可达90%，但是成人以及复发儿童B-ALL的预后仍差。近年来经过大量的基因组研究，越来越多的致病基因被纳入B-ALL的预后分层标准。IKZF1基因外显子缺失突变是B-ALL中最常见的基因突变之一，属于独立的预后不良因素，以IK6和IK10型突变转录本最常见。因此对IKZF1异常转录本的鉴定具有重要意义。
目前主要通过基因芯片分析基因组水平的IKZF1外显子缺失，也有用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测突变型IKZF1转录本。但这些方法存在检测灵敏度低、难以定量分析和对少见型IKZF1异常转录本鉴定困难等缺点。转录组测序(RNA-seq)是用高通量基因测序技术对标本中所有基因转录产物进行测序分析。RNA-seq数据中包含丰富的基因表达、基因融合、剪接异构体和基因突变等信息。IKZF1是B细胞发育过程中重要的转录因子，IKZF1突变的B-ALL肿瘤细胞中高表达突变型转录本，这使得通过RNA-seq分析IKZF1异常转录本成为可能。本研究拟建立一套生物信息分析流程，通过RNA-seq数据对B-ALL中的IKZF1转录本进行分型和定量分析。
第一作者：张建平，通讯作者：陆佩华，陆道培医院；摘要号：1445
“Significant Long-Term Benefits of CAR T-Cell Therapy Followed By a Second Allo-HSCT for Relapsed/Refractory (R/R) B-Cell Acute Lymphoblastic Leukemia (B-ALL) Patients Who Relapsed after an Initial Transplant”
（第一次异基因造血干细胞移植后复发的B-ALL患者，CAR-T治疗后桥接二次移植可获益）
移植后复发的B-ALL，治疗困难，预后差。本研究纳入2017年至2020年间的23例移植后复发的B-ALL患者，中位年龄20岁(3-58岁)，8/23例患者是在第一次移植后6月内复发，CAR-T输注前骨髓原始细胞中位为72.5%(1.5%-94.5%)。15例CAR-T细胞来源于第一次移植的供者，8例来源自患者。所有患者接受FC清淋巴细胞预处理，输注的CAR-T细胞中位数为3×105/kg (1×105-6×105/kg)，输注CAR-T后30d评估，均获得MRD- CR。
16/23例 (69.6%)患者出现CRS，2/23例(8.7%)为III级CRS，无IV级CRS。2例患者出现III级神经毒性。所有患者桥接二次移植，CAR-T治疗和二次移植间隔中位67 d(39d- 329d)，中位随访258d (84-978 d)，无复发，4例出现急性GVHD，5/23例(21.7%) 患者死于移植相关并发症。1年OS为68.0%。
结果初步证明，对移植后复发的B-ALL，CAR-T治疗有效，可获得MRD阴性的完全缓解，CRS和神经毒性无明显增加，联合二次移植可能改善这部分难治患者的预后。
第一作者：吴雪英，通讯作者：王卉，陆道培医院；摘要号：1495
“Peripheral Blood Monoclonal B-Cell and/or Plasma Cell Detection By Flow Cytometry in Screening and Monitoring EBV-Positiv Post-Transplant Lymphoproliferative Disorders”
（流式细胞术检测外周血单克隆B细胞和/或浆细胞可以有效筛查和监测EBV阳性PTLD）
PTLD是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后一种严重并发症。常规诊断依据为临床症状、病毒拷贝数、影像学检测、病理检查，其中病理是PTLD的诊断金标准。但是临床中有些患者无法采集病理标本，并且病理不便于疗效监测。因此急需一种简单、高效、易操作、敏感、特异的诊断和监测方法。
流式细胞室吴雪英、王卉发现流式细胞术检测单克隆B细胞和/或浆细胞可以有效筛查和随访PTLD。对2018、2019年在陆道培医院移植的1470患者外周血进行流式检测，结果EBV+ PTLD发生率2.9%。流式筛查PTLD的灵敏度为 90.91%，特异性 98.40%，阳性预测值85.17%，阴性预测值 99.08%。治疗有效率87.5%。
第一作者：陈佳琦，通讯作者：刘红星，陆道培医院；摘要号：1883
“NGS-Based Screening to Comprehensively Decipher TKIs Resistant Mutations in BCR-ABL1 Positive Leukemias”
（基于NGS筛查全面破译BCR-ABL1阳性白血病TKIs耐药突变特征）
在BCR-ABL1阳性白血病中，BCR-ABL1激酶结构域的突变是最常见的TKIs耐药机制。Sanger测序目前是检测ABL1激酶结构域突变的金标准，但其检测灵敏度低，且无法区分复合或多克隆突变。对于接受多次连续TKI治疗的重症患者，以及具有多种突变背景和发生临床耐药性风险较高的患者，复合突变或多克隆突变分析尤其重要。近年来，基于NGS的BCR-ABL1激酶结构域突变筛选方案为解密突变的复杂模式和更高的检测灵敏度提供了强大的工具。
基于NGS技术，我们回顾性的分析了348例经过Sanger测序检测的标本。结果表明，基于NGS的筛选方案对比Sanger测序，可以更全面地解读TKIs耐药突变的复杂模式，值得在临床实践中使用。
第一作者：张弦，通讯作者：陆佩华，陆道培医院；摘要号：1898
“Factors Predicting Long-Term Survival Following CD19 CAR T-Cell Therapy in Relapsed/Refractory B-Cell Acute Lymphoblastic Leukemia”
（CD19-CAR-T细胞治疗复发/难治性B细胞急性淋巴细胞白血病长期生存的预测因素）
以CD19为靶点的嵌合抗原受体（CAR-T）细胞治疗对复发难治性B细胞急性淋巴细胞白血病（R/R B-ALL）具有良好的疗效。然而，CAR-T后复发仍然是一个主要问题。我们分析了231例R/R B-ALL患者接受CAR-T治疗后1个月内达到完全缓解（CR）的病人的部分相关因素对总生存率（OS）、无白血病生存率（LFS）和累积复发率（CRR）的影响。
通过单因素连续变量分析，我们发现CAR-T前高肿瘤负荷和第30天CD19+B/淋巴细胞比率提示预后差。而年龄、CAR-T细胞剂量、第30天CAR-T/T细胞比率、CAR-T细胞后桥接异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）的间隔时间对远期疗效无明显影响。
第一作者：陈曼，通讯作者：王卉，陆道培医院；摘要号：2465
“OneTube 24 Color Full Spectral Flow Cytometry and Multi-Dimensional Software to Study the Maturation Pattern and Antigen Expression of the Myeloid”
（一管24色全光谱流式细胞术和多维软件研究髓系抗原表达和成熟模式）
流式细胞术经历了40多年的发展，在临床和科研工作中具有不可替代的举足轻重的地位。传统流式不断进步，2019年问世的全光谱流式更是颠覆了传统流式的理念，取得突破性进展。
陆道培医疗集团流式实验室陈曼、王卉等设计了24种髓系标志方案，成功使用全光谱流式检测正常髓系发育和恶性髓系肿瘤，成功解析髓系复杂发育模式和抗原表达情况。这种超多色流式细胞术方法，一方面可以改善AML MRD监测的灵敏度，同时还可以监测免疫指标，以及常规流式易于忽略的弱势亚群如DC、肥大细胞、嗜碱性粒细胞等。而flowjo等多维软件分析，成为人工智能的雏形，实现了高效分析更多数据和同时结合多项指标，为进一步提高AML MRD检测的灵敏度、特异性、自动化、智能性提供可能。
第一作者：聂代静，通讯作者：刘红星，陆道培医院；摘要号：2816
“Fanconi Anemia Gene Associated Germline Predisposition in Aplastic Anemia and Hematologic Malignancies”
（范可尼贫血基因相关再生障碍性贫血和血液肿瘤胚系易患研究）
范可尼贫血（FA）是最常见的遗传性骨髓衰竭综合征，其血液肿瘤发病率明显升高。2016版世界卫生组织造血和淋巴组织肿瘤分类将其单独分类为伴胚系易感的髓系肿瘤。FA杂合携带者是否骨髓衰竭和肿瘤易感尚不明确。为解答此疑问，我们回顾性研究了788例再生障碍性贫血（AA）和血液肿瘤患者BRCA2，FANCA，FANCC，FANCD2和FANCG基因的罕见可能致病突变（PSV）。
总体队列中，有AA患者243例，骨髓异常增生综合征（MDS）患者27例，急性髓系白血病（AML）患者208例和急性淋巴细胞白血病（ALL）患者276例。总体年龄均数10岁，年龄分布区间1-65岁。我们共在66例患者中检测到68个PSV，突变频率最高的是FANCA 基因（n=29），其次为BRCA2基因（n=20）。与EXAC数据库东亚人数据对比，队列中PSV频率明显升高（p=0.016）。ALL患者显示出BRCA2-PSV频率明显升高（p=0.038），AA患者和AML 患者均显示出FANCA-PSV明显升高（p = 0.020，p = 0.008）。FA-PSV状态与累计发病率无关。FA-PSV阳性的患者肿瘤突变负荷更高、细胞遗传学异常更多，但是其表观遗传调控基因和剪接体基因突变率更低。FA-PSV在队列中的富集表明FA基因杂合突变损害了携带者DNA重组修复的能力，导致造血衰竭。此外，我们首次显示BRCA2胚系突变与ALL发病相关。该研究为FA杂合突变携带者血液肿瘤易感提供了证据。
墙报摘要 10第一作者：宫美维，通讯作者：王卉，陆道培医院；摘要号：2821
“CD69 is a Very Useful Marker for the Minimal Residual Disease and Related Mast Cell Assessment of Acute Myeloid Leukemia”
（CD69是AML的MRD指标之一并可以评价AML相关肥大细胞）
微小残留病变（MRD）是恶性血液病重要的疾病监控、判断预后、指导治疗的指标，目前临床常用的灵敏度较高的检测方法包括实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）、多色流式（MFC）等。MFC通过分析细胞抗原表达情况区分正常细胞与异常细胞，具有快速、性价比高、覆盖范围广、灵敏度高、特异性高的特点。目前流式细胞术对急性髓系白血病（AML）检测敏感性为10-3~10-4，虽然文献报道覆盖率为80-95%，但是临床工作中低比例（低于0.1%）MRD检测、以及缺乏特异性标志的标本检测仍旧遇到瓶颈。
陆道培医疗集团流式细胞室的宫美维、王卉等进行了一项研究，探讨CD69在急性髓系白血病（AML）微小残留病变（MRD）检测中的临床意义。结果发现CD69作为AML MRD指标，阳性率42.15%，特异性100%。其表达与DNMT3A基因突变正相关，与Kit 和CEBPA突变负相关。此外，经过流式细胞术分选证实，RUNX1-RUNXT1阳性的CR期AML病例中，异常基因存在于肥大细胞内，这些细胞高表达CD69和CD33，异常表达CD2和CD25。
第一作者：张阳，通讯作者：刘红星，陆道培医院；摘要号：2911
“DDX41 Mutations in Myeloid Neoplasms and Acute Leukemias”
（急性白血病和髓系肿瘤患者中DDX41基因突变分析）
DDX41基因突变作为明确的髓系肿瘤胚系易感指标，已被纳入2016版WHO血液肿瘤指南中。然而，目前在髓系肿瘤之外的血液肿瘤中报道的有限。我们通过采用靶向扩增子高通量测序方法，对一个未经选择的血液病队列中DDX41基因突变的发生率和突变特征进行了分析。
结果显示，0.8%的髓系肿瘤、1.2%的B-ALL和1.2%的T-ALL携带DDX41突变。总共在17例患者（AML 5例，MDS 1例，CMML 1例，B-ALL 7例，T-ALL 2例，AA 1例）中检测了21个不同的DDX41突变，其中9个突变位点为首次报道。对携带不同胚系突变髓系肿瘤患者的年龄进行对比分析，发现携带胚系错义突变患者的平均年龄显著低于携带胚系无义突变的患者（41y vs 68y, P=0.034）。分析ALL患者的DDX41突变特征，发现与髓系肿瘤中显著不同，提示致病机制可能不同。
本研究首次报道了ALL中的DDX41突变，扩大了DDX41基因的突变谱及表型谱，更加深入了我们对DDX41突变基因型-表型相关性的认识。
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